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摘要 [目的]建立同时测定茵栀解毒颗粒中绿原酸、黄芩苷、栀子苷3个成分含量的方法。[方法]采用Agilent Eclipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），以乙腈（A）～0.2% 磷酸水溶液（B）为流动相，梯度洗脱，流速1 mL/min，柱温30 ℃，检测波长327 nm（0～9.5 min，测定绿原酸）、238 nm（9.5～14.0 min，测定栀子苷）、278 nm（14～30 min，测定黄芩苷）。[结果]各待测组分分离度良好;绿原酸、黄芩苷、栀子苷3个成分的进样量分别在5.01～100.00 μg/mL（r=0.999 7）、6.25～100.00 μg/mL（r=0.999 5）、10.86～400.00 μg/mL （r=0.999 3）与峰面积呈良好的线性关系;加样回收率分别为98.5%、100.0%、99.0%（n=6），RSD分别为0.2%、0.7%、0.4%。[结论]该试验建立的含量测定方法符合方法学验证要求，可用于茵栀解毒颗粒的3个指标性成分的同时测定。该方法简便、准确度高、重复性好，为进一步控制茵栀解毒颗粒的质量标准提供了依据。
关键词 茵栀解毒颗粒;绿原酸;黄芩苷;栀子苷;含量测定;高效液相色谱;梯度洗脱;波长切换
中图分类号 R284.1 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2020）21-0198-04
Abstract [Objective]To establish a method for the simultaneous determination of chlorogenic acid， baicalin and geniposide in Yinzhi Jiedu granules.[Method]The chromatographic separation was carried out on a Agilent Eclipse XDBC18 column（ 4.6 mm × 250 mm，5 μm） with a mobile phase consisting of acetonitrile （A）-0.2% phosphoric acid solution（ B） in a gradient mode at a flow rate of 1 mL/min.Column temperature was 30 ℃，the UV detection wavelength was set at 327 nm for chlorogenic acid in the first 9.5 min，238 nm for geniposide during 9.5-14.0 min，278 nm for baicalin during 14-30 min.[Result]Excellent chromatographic separation was achieved and the ranges for linear correlation of chlorogenic acid，baicalin and geniposide were 5.01-100.00 μg/mL （r=0.999 7），6.25-100.00 μg/mL （r=0.999 5），10.86-400.00 μg/mL （r=0.999 3），respectively.The sample recovery rates were 98.5%， 100.0%， and 99.0% （n = 6）， and the RSD were 0.2%， 0.7%， and 0.4%， respectively.[Conclusion]This method is consistent with the method validation requirements，and can simultaneously determine the above 3 index components of Yinzhi Jiedu granules.The method is simple， accurate and repeatable， and provides a basis for further control of the quality standard of Yinzhi Jiedu granules.
Key words Yinzhi Jiedu granules;Chlorogenic acid;Baicalin;Geniposide;Content determination;HPLC;Gradient elution;Wavelength shift
作者簡介 郑举（1973—），男，安徽萧县人，高级兽医师，从事畜禽产品安全、动物防疫工作。*通信作者，高级兽医师，硕士，从事中兽药检测技术研究。
收稿日期 2020-03-13;修回日期 2020-04-15
茵栀解毒颗粒由茵陈、栀子、虎杖、黄芩、钩藤5味中药组成，该药物具有清热解毒、疏肝解痉之功效，兽医临床用于雏鸭病毒性肝炎[1-5]。茵栀解毒颗粒为《兽药质量标准》2017年版（中药卷）收录的中药制剂，但只测定其中绿原酸的含量，对其他成分未有规定，不利于整体控制药品的质量。该试验在相关文献的基础上[6-16]，以其中3种药材的代表性成分为检测指标，建立了同一流动相条件下同时测定茵栀解毒颗粒中茵陈、栀子、黄芩的3个特征性成分绿原酸、栀子苷、黄芩苷成分含量的HPLC法，既提高了制剂的质量控制，又简化了日常操作，为完善其质量标准提供了参考依据，对于该药标准的修订具有重要意义。
1 材料与方法
1.1 仪器
Agilent1100型高效液相色谱仪（四元梯度泵/G1311A，自动进样器/G1379A，真空在线脱气机，G1315DAD检测器），美国Agilent公司;EX125DZH十万分之一分析天平（奥豪斯仪器有限公司）;Sartorius BP211D万分之一分析天平（德国赛多利斯）;水由实验室MILLI-Q超纯水自制; SK7200HP型超声波清洗器（上海科导）;手动移液器（Eppendorf，德国）;0.45 μm混合滤膜（美国Waters公司）。 1.2 试药
甲醇、乙腈（Thermo Fisher Scientific公司）为色谱纯，其余试剂为分析纯，超纯水、蒸馏水为自制。茵栀解毒颗粒由安徽省某兽药有限公司提供（批号 20190811、20190712、20190919、20191010、20191101）。对照品绿原酸（批号 Z0261702，规格 98.3%）购于中国兽医药品监察所，栀子苷（批号110749-201617，规格98.4%）、黄芩苷（批号110715-201720，规格 93.52%）购于中国食品药品检定研究院。
1.3 方法
1.3.1 色谱条件。
采用 Agilent Eclipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈（A）～ 0.2% 磷酸水溶液（B），梯度洗脱（0～5 min，13%A;5～10 min，13%A～30%A;10～15 min，30%A～85%A;15～25 min，85%A;25～26 min，85%A～13%A;26～30 min，13%A），流 速1 mL/min，检测波长327 nm（0～9.5 min，测定绿原酸）、238 nm（9.5～14.0 min，测定栀子苷）、278 nm（14～30 min，测定黄芩苷），柱温 30 ℃，进样量 10 μL。在上述色谱条件下，各待测组分分离度均大于1.5，理论塔板数均大于6 000。在此条件下，色谱图及光谱图如图1～4所示。
1.3.2 對照品储备液的制备。
精密称取绿原酸、栀子苷、黄芩苷的对照品适量，分别置于10 mL容量瓶中，用50%甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，配制成质量浓度为绿原酸 1.0 mg/mL、栀子苷1.0 mg/mL、黄芩苷0.1 mg/mL的溶液。作为对照品储备液。
1.3.3 混合对照品溶液的制备。
精密吸取绿原酸对照品储备液250 μL、栀子苷对照品储备液 500 μL、黄芩苷对照品储备液 2 mL，置于10 mL棕色容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，得浓度为绿原酸 25.86 μg/mL、栀子苷50.15 μg/mL、黄芩苷 200.18 μg/mL 的混合对照品溶液，冷藏，备用。
1.3.4 供试品溶液的制备。
将茵栀解毒颗粒研细，过40目筛，精密称取3.0 g，置于50 mL锥形瓶中，精密加入体积分数为50%甲醇50 mL，称量，超声提取（功率500 W，频率40 kHz），提取10 min，放冷再称量，加体积分数为50%甲醇水溶液补足减失的量，加500 μL冰醋酸，取适量经0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液上机分析。
1.3.5 阴性样品溶液的制备。按处方分别制备缺少茵陈、栀子和黄芩的阴性对照溶液。按“1.3.4”供试品溶液的制备方法进行制备，即得3种阴性样品溶液。
2 结果与分析
2.1 专属性试验
混合对照品溶液、供试品溶液及缺茵陈、缺栀子、缺黄芩的3种阴性对照溶液各10 μL，在“1.3.1”色谱条件下分别注入色谱仪，进行分析，根据色谱图的出峰时间，得出茵栀解毒颗粒在与绿原酸、栀子苷、黄芩苷对照品相应的位置上，均有相同保留时间的色谱峰，而缺茵陈的阴性对照溶液无绿原酸色谱峰，缺栀子的阴性对照溶液中无栀子苷色谱峰，缺黄芩的阴性对照溶液无黄芩苷色谱峰，说明茵栀解毒颗粒中其他成分对这3个成分的检测不产生干扰，方法的专属性好。同时依据DAD检测器的峰纯度检测功能，得出3种成分的纯度角度小于纯度阈值，说明样品的成分得到良好的分离。
2.2 线性关系考察
分别精密量取混合对照品溶液0.5、1.0、2.0、4.0、5.0 mL，置5 mL容量瓶中，用体积分数为50%甲醇稀释至刻度，摇匀，按照“1.3.1”色谱条件进行测定。以峰面积（Y）为纵坐标、对照品溶液的质量浓度（X，μg/mL）为横坐标，绘制标准曲线并进行回归分析计算，结果见表 1。 从表1可以看出，绿原酸、栀子苷、黄芩苷在定量测定范围内线性关系良好。
2.3 精密度试验
取同一混合对照品溶液，按“1.3.1”色谱条件连续进样6次测定，记录峰面积。计算得出绿原酸、栀子苷、黄芩苷峰面积的RSD分别为 0.8%、1.1%、0.6%，均符合要求，表明仪器精密度良好。
2.4 稳定性试验
取同一供试品溶液10 μL，室温下放置0、2、4、6、8、10、12、24 h，按“1.3.1”色谱条件下进样分析，记录峰面积。计算得出绿原酸、栀子苷、黄芩苷峰面积的RSD分别为0.5%、0.3%、0.4%，表明供试品溶液室温放置24 h 内稳定。
2.5 重复性试验
精密称取茵栀解毒颗粒（批号20190811）的样品6份，每份3.0 g，按“1.3.4”方法制得供试品溶液，按“1.3.1”色谱条件进样分析，按外标法计算各组分含量及其RSD。测得绿原酸、栀子苷、黄芩苷的含量平均值分别为0.358、0.701、3.156 mg/g，RSD分别为 0.8%、0.6%、0.7%（n=6），表明该方法的重复性良好。
2.6 加样回收率试验
取已知含量的茵栀解毒颗粒（批号20190811）粉末6份，每份约2.0 g，精密称定，精密加入已知浓度的绿原酸、栀子苷、黄芩苷对照品的混合溶液2 mL，按“1.3.4”方法制成供试品溶液，按“1.3.1”色谱条件进样分析，结果见表2。从表2可以看出，绿原酸、栀子苷、黄芩苷的平均加样回收率及RSD均符合要求。
2.7 含量测定
精密称取茵栀解毒颗粒5份，按“1.3.4”方法制成供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各10 μL，按“1.3.1”色谱条件进样分析，外标法进行含量测定。结果见表3。 3 讨论
3.1 提取条件的选择
利用单因素考察法，对提取方法、提取溶剂、提取时间3个因素进行了考察。在提取溶剂浓度的选择上，比较了浓度25%、50%、75%、100%的甲醇对各组分的提取效果，试验结果显示，50%甲醇提取茵栀解毒颗粒中的3种成分含量最高。在提取方法上分别选择超声、回流2种提取方法，结果显示超声提取效率最高，且简便快捷。与此同时在超声提取时间上分别比较了5、10、15、20、30 min对茵栀解毒颗粒的提取效果，试验结果显示，样品在超声 10 min 提取效率达到最高。最终选择的提取方法是用50%甲醇超声提取10 min。
3.2 检测波长的选择
同一物质在不同检测波长下具有不同的响应值。在该试验中利用DAD（光电二极管阵列检测器）对这3种化合物进行190～400 nm扫描，根据绿原酸、栀子苷、黄芩苷的特征光谱图，确定这3种物质的最大吸收波长，同时结合流动相的梯度洗脱的特性，可以将复杂基质的成分进行分离，最终确定为 0～9.5 min 时327 nm测定绿原酸，9.5～14.0 min 时238 nm测定栀子苷，14～30 min 时 278 nm测定黄芩苷。
3.3 流动相的选择
该试验考察了多种流动相体系，首先以甲醇-水（13∶87）、甲醇-磷酸-水（30∶0.1∶70）作为流动相，进行等度、梯度洗脱，结果发现绿原酸和栀子苷的分离效果不太好，又考察了乙腈-磷酸-水、等度和梯度，发现采用梯度洗脱时3种化合物得到的色谱峰符合分离要求，最后筛选出乙腈和磷酸溶液作为流动相进行梯度洗脱。经试验验证，该流动相体系基线平稳、无拖尾现象，3种成分色谱峰分离度达到要求，符合系统适用性的要求。故以此为该检测方法的流动性。
3.4 耐用性考察
根据“1.3.1”色谱条件，分别考察了4款不同品牌的色谱柱Phenomenex Luna C18（4.6 mm×200 mm，5 μm）、Waters Ultimate XB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）、Aglient Eclipse XDB C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）和Thermo HyPurity C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），设定了3个柱温（25、35、40 ℃）、3个流速（0.8、1.0、1.2 mL/min），結果表明上述条件下各组分的分离度和理论塔板数均能达到要求，证明该方法耐用性较好。
4 小结
该试验建立了HPLC-DAD波长切换法同时测定茵栀解毒颗粒中绿原酸、栀子苷、黄芩苷的方法，保证各成分在最大吸收波长处检测，且仅使用1个色谱条件即可实现多个指标成分的质量分析。方法学验证结果符合《中国兽药典》2015年版中质量分析方法验证指导原则的要求。该方法的供试品溶液制备简便快捷，所建立的梯度洗脱方法分离度好，测定结果准确、重复性好、实用性强，有利于茵栀解毒颗粒整体质量的控制。
参考文献
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关键词 茵栀解毒颗粒;绿原酸;黄芩苷;栀子苷;含量测定;高效液相色谱;梯度洗脱;波长切换
中图分类号 R284.1 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2020）21-0198-04
Abstract [Objective]To establish a method for the simultaneous determination of chlorogenic acid， baicalin and geniposide in Yinzhi Jiedu granules.[Method]The chromatographic separation was carried out on a Agilent Eclipse XDBC18 column（ 4.6 mm × 250 mm，5 μm） with a mobile phase consisting of acetonitrile （A）-0.2% phosphoric acid solution（ B） in a gradient mode at a flow rate of 1 mL/min.Column temperature was 30 ℃，the UV detection wavelength was set at 327 nm for chlorogenic acid in the first 9.5 min，238 nm for geniposide during 9.5-14.0 min，278 nm for baicalin during 14-30 min.[Result]Excellent chromatographic separation was achieved and the ranges for linear correlation of chlorogenic acid，baicalin and geniposide were 5.01-100.00 μg/mL （r=0.999 7），6.25-100.00 μg/mL （r=0.999 5），10.86-400.00 μg/mL （r=0.999 3），respectively.The sample recovery rates were 98.5%， 100.0%， and 99.0% （n = 6）， and the RSD were 0.2%， 0.7%， and 0.4%， respectively.[Conclusion]This method is consistent with the method validation requirements，and can simultaneously determine the above 3 index components of Yinzhi Jiedu granules.The method is simple， accurate and repeatable， and provides a basis for further control of the quality standard of Yinzhi Jiedu granules.
Key words Yinzhi Jiedu granules;Chlorogenic acid;Baicalin;Geniposide;Content determination;HPLC;Gradient elution;Wavelength shift
作者簡介 郑举（1973—），男，安徽萧县人，高级兽医师，从事畜禽产品安全、动物防疫工作。*通信作者，高级兽医师，硕士，从事中兽药检测技术研究。
收稿日期 2020-03-13;修回日期 2020-04-15
茵栀解毒颗粒由茵陈、栀子、虎杖、黄芩、钩藤5味中药组成，该药物具有清热解毒、疏肝解痉之功效，兽医临床用于雏鸭病毒性肝炎[1-5]。茵栀解毒颗粒为《兽药质量标准》2017年版（中药卷）收录的中药制剂，但只测定其中绿原酸的含量，对其他成分未有规定，不利于整体控制药品的质量。该试验在相关文献的基础上[6-16]，以其中3种药材的代表性成分为检测指标，建立了同一流动相条件下同时测定茵栀解毒颗粒中茵陈、栀子、黄芩的3个特征性成分绿原酸、栀子苷、黄芩苷成分含量的HPLC法，既提高了制剂的质量控制，又简化了日常操作，为完善其质量标准提供了参考依据，对于该药标准的修订具有重要意义。
1 材料与方法
1.1 仪器
Agilent1100型高效液相色谱仪（四元梯度泵/G1311A，自动进样器/G1379A，真空在线脱气机，G1315DAD检测器），美国Agilent公司;EX125DZH十万分之一分析天平（奥豪斯仪器有限公司）;Sartorius BP211D万分之一分析天平（德国赛多利斯）;水由实验室MILLI-Q超纯水自制; SK7200HP型超声波清洗器（上海科导）;手动移液器（Eppendorf，德国）;0.45 μm混合滤膜（美国Waters公司）。 1.2 试药
甲醇、乙腈（Thermo Fisher Scientific公司）为色谱纯，其余试剂为分析纯，超纯水、蒸馏水为自制。茵栀解毒颗粒由安徽省某兽药有限公司提供（批号 20190811、20190712、20190919、20191010、20191101）。对照品绿原酸（批号 Z0261702，规格 98.3%）购于中国兽医药品监察所，栀子苷（批号110749-201617，规格98.4%）、黄芩苷（批号110715-201720，规格 93.52%）购于中国食品药品检定研究院。
1.3 方法
1.3.1 色谱条件。
采用 Agilent Eclipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈（A）～ 0.2% 磷酸水溶液（B），梯度洗脱（0～5 min，13%A;5～10 min，13%A～30%A;10～15 min，30%A～85%A;15～25 min，85%A;25～26 min，85%A～13%A;26～30 min，13%A），流 速1 mL/min，检测波长327 nm（0～9.5 min，测定绿原酸）、238 nm（9.5～14.0 min，测定栀子苷）、278 nm（14～30 min，测定黄芩苷），柱温 30 ℃，进样量 10 μL。在上述色谱条件下，各待测组分分离度均大于1.5，理论塔板数均大于6 000。在此条件下，色谱图及光谱图如图1～4所示。
1.3.2 對照品储备液的制备。
精密称取绿原酸、栀子苷、黄芩苷的对照品适量，分别置于10 mL容量瓶中，用50%甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，配制成质量浓度为绿原酸 1.0 mg/mL、栀子苷1.0 mg/mL、黄芩苷0.1 mg/mL的溶液。作为对照品储备液。
1.3.3 混合对照品溶液的制备。
精密吸取绿原酸对照品储备液250 μL、栀子苷对照品储备液 500 μL、黄芩苷对照品储备液 2 mL，置于10 mL棕色容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，得浓度为绿原酸 25.86 μg/mL、栀子苷50.15 μg/mL、黄芩苷 200.18 μg/mL 的混合对照品溶液，冷藏，备用。
1.3.4 供试品溶液的制备。
将茵栀解毒颗粒研细，过40目筛，精密称取3.0 g，置于50 mL锥形瓶中，精密加入体积分数为50%甲醇50 mL，称量，超声提取（功率500 W，频率40 kHz），提取10 min，放冷再称量，加体积分数为50%甲醇水溶液补足减失的量，加500 μL冰醋酸，取适量经0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液上机分析。
1.3.5 阴性样品溶液的制备。按处方分别制备缺少茵陈、栀子和黄芩的阴性对照溶液。按“1.3.4”供试品溶液的制备方法进行制备，即得3种阴性样品溶液。
2 结果与分析
2.1 专属性试验
混合对照品溶液、供试品溶液及缺茵陈、缺栀子、缺黄芩的3种阴性对照溶液各10 μL，在“1.3.1”色谱条件下分别注入色谱仪，进行分析，根据色谱图的出峰时间，得出茵栀解毒颗粒在与绿原酸、栀子苷、黄芩苷对照品相应的位置上，均有相同保留时间的色谱峰，而缺茵陈的阴性对照溶液无绿原酸色谱峰，缺栀子的阴性对照溶液中无栀子苷色谱峰，缺黄芩的阴性对照溶液无黄芩苷色谱峰，说明茵栀解毒颗粒中其他成分对这3个成分的检测不产生干扰，方法的专属性好。同时依据DAD检测器的峰纯度检测功能，得出3种成分的纯度角度小于纯度阈值，说明样品的成分得到良好的分离。
2.2 线性关系考察
分别精密量取混合对照品溶液0.5、1.0、2.0、4.0、5.0 mL，置5 mL容量瓶中，用体积分数为50%甲醇稀释至刻度，摇匀，按照“1.3.1”色谱条件进行测定。以峰面积（Y）为纵坐标、对照品溶液的质量浓度（X，μg/mL）为横坐标，绘制标准曲线并进行回归分析计算，结果见表 1。 从表1可以看出，绿原酸、栀子苷、黄芩苷在定量测定范围内线性关系良好。
2.3 精密度试验
取同一混合对照品溶液，按“1.3.1”色谱条件连续进样6次测定，记录峰面积。计算得出绿原酸、栀子苷、黄芩苷峰面积的RSD分别为 0.8%、1.1%、0.6%，均符合要求，表明仪器精密度良好。
2.4 稳定性试验
取同一供试品溶液10 μL，室温下放置0、2、4、6、8、10、12、24 h，按“1.3.1”色谱条件下进样分析，记录峰面积。计算得出绿原酸、栀子苷、黄芩苷峰面积的RSD分别为0.5%、0.3%、0.4%，表明供试品溶液室温放置24 h 内稳定。
2.5 重复性试验
精密称取茵栀解毒颗粒（批号20190811）的样品6份，每份3.0 g，按“1.3.4”方法制得供试品溶液，按“1.3.1”色谱条件进样分析，按外标法计算各组分含量及其RSD。测得绿原酸、栀子苷、黄芩苷的含量平均值分别为0.358、0.701、3.156 mg/g，RSD分别为 0.8%、0.6%、0.7%（n=6），表明该方法的重复性良好。
2.6 加样回收率试验
取已知含量的茵栀解毒颗粒（批号20190811）粉末6份，每份约2.0 g，精密称定，精密加入已知浓度的绿原酸、栀子苷、黄芩苷对照品的混合溶液2 mL，按“1.3.4”方法制成供试品溶液，按“1.3.1”色谱条件进样分析，结果见表2。从表2可以看出，绿原酸、栀子苷、黄芩苷的平均加样回收率及RSD均符合要求。
2.7 含量测定
精密称取茵栀解毒颗粒5份，按“1.3.4”方法制成供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各10 μL，按“1.3.1”色谱条件进样分析，外标法进行含量测定。结果见表3。 3 讨论
3.1 提取条件的选择
利用单因素考察法，对提取方法、提取溶剂、提取时间3个因素进行了考察。在提取溶剂浓度的选择上，比较了浓度25%、50%、75%、100%的甲醇对各组分的提取效果，试验结果显示，50%甲醇提取茵栀解毒颗粒中的3种成分含量最高。在提取方法上分别选择超声、回流2种提取方法，结果显示超声提取效率最高，且简便快捷。与此同时在超声提取时间上分别比较了5、10、15、20、30 min对茵栀解毒颗粒的提取效果，试验结果显示，样品在超声 10 min 提取效率达到最高。最终选择的提取方法是用50%甲醇超声提取10 min。
3.2 检测波长的选择
同一物质在不同检测波长下具有不同的响应值。在该试验中利用DAD（光电二极管阵列检测器）对这3种化合物进行190～400 nm扫描，根据绿原酸、栀子苷、黄芩苷的特征光谱图，确定这3种物质的最大吸收波长，同时结合流动相的梯度洗脱的特性，可以将复杂基质的成分进行分离，最终确定为 0～9.5 min 时327 nm测定绿原酸，9.5～14.0 min 时238 nm测定栀子苷，14～30 min 时 278 nm测定黄芩苷。
3.3 流动相的选择
该试验考察了多种流动相体系，首先以甲醇-水（13∶87）、甲醇-磷酸-水（30∶0.1∶70）作为流动相，进行等度、梯度洗脱，结果发现绿原酸和栀子苷的分离效果不太好，又考察了乙腈-磷酸-水、等度和梯度，发现采用梯度洗脱时3种化合物得到的色谱峰符合分离要求，最后筛选出乙腈和磷酸溶液作为流动相进行梯度洗脱。经试验验证，该流动相体系基线平稳、无拖尾现象，3种成分色谱峰分离度达到要求，符合系统适用性的要求。故以此为该检测方法的流动性。
3.4 耐用性考察
根据“1.3.1”色谱条件，分别考察了4款不同品牌的色谱柱Phenomenex Luna C18（4.6 mm×200 mm，5 μm）、Waters Ultimate XB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）、Aglient Eclipse XDB C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）和Thermo HyPurity C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），设定了3个柱温（25、35、40 ℃）、3个流速（0.8、1.0、1.2 mL/min），結果表明上述条件下各组分的分离度和理论塔板数均能达到要求，证明该方法耐用性较好。
4 小结
该试验建立了HPLC-DAD波长切换法同时测定茵栀解毒颗粒中绿原酸、栀子苷、黄芩苷的方法，保证各成分在最大吸收波长处检测，且仅使用1个色谱条件即可实现多个指标成分的质量分析。方法学验证结果符合《中国兽药典》2015年版中质量分析方法验证指导原则的要求。该方法的供试品溶液制备简便快捷，所建立的梯度洗脱方法分离度好，测定结果准确、重复性好、实用性强，有利于茵栀解毒颗粒整体质量的控制。
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