【摘 要】
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目的 设计家蝇抗真菌肽MAF-1A衍生肽Mt6-21DLeu,探讨其抗白色念珠菌(Candida albicans,Ca)活性及作用机制. 方法 通过氨基酸替换法设计MAF-1A衍生肽Mt6-21DLeu;采用微量液体
【机 构】
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江苏省免疫与代谢重点实验室,江苏徐州221004;贵州医科大学基础医学院微生物学教研室,贵州贵阳550025;贵州医科大学基础医学院寄生虫学教研室,贵州贵阳550025
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目的 设计家蝇抗真菌肽MAF-1A衍生肽Mt6-21DLeu,探讨其抗白色念珠菌(Candida albicans,Ca)活性及作用机制. 方法 通过氨基酸替换法设计MAF-1A衍生肽Mt6-21DLeu;采用微量液体稀释法测定Mt6-21DLeu对Ca的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MFC)以及不同环境中Mt6-21 DLeu对Ca抑菌活性的变化;通过时间-杀菌曲线反映Mt6-21DLeu对Ca的杀菌动力学;通过结晶紫染色测定Mt6-21DLeu对Ca不同阶段生物被膜的清除作用;采用多功能酶标仪检测荧光探针DPH的相对荧光密度;荧光显微镜观察Mt6-21DLeu的细胞膜通透性;采用流式细胞仪检测Mt6-21DLeu影响Ca活性氧ROS生成的影响. 结果 与MAF-1A相比,Mt6-21DLeu抑制Ca生长的效果提高近5倍,其MIC和MFC分别为0.128 mg/ml和0.256 mg/ml.在盐离子环境中,Mt6-21DLeu活性几乎不受影响,胰酶环境对Mt6-21DLeu有所抑制但远小于对MAF-1A活性的干扰.时间-杀菌曲线结果显示在MIC和2 MIC浓度下,Mt6-21DLeu于9h后逐渐抑制Ca的生长;4 MIC浓度时Mt6-21DLeu的杀菌能力增强.Mt6-21DLeu在4、24、48 h时均能部分清除Ca已形成的生物被膜,清除效果与Mt6-21DLeu的浓度有关;4 MIC浓度的Mt6-21DLeu能显著增加Ca细胞膜的流动性(P＜0.01)及通透性,进而引起Ca菌体内ROS的积累. 结论 衍生肽Mt6-21DLeu能高效、持久、稳定地抑杀Ca,其抗菌作用可能通过增强细胞膜通透性、促进胞内ROS积累的多靶点模式实现.因此,可将Mt6-21DLeu作为治疗Ca感染的候选药物分子.
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