在前期研究基础上,进一步探讨与促肾上腺皮质激素非依赖性肾上腺大结节增生(adrenocorticotropin-independent macronodular adrenal hyperplasia,AIMAH)发病相关的微小核糖核酸(microRNA)对肾上腺皮质细胞(SW-13细胞)增殖及凋亡的影响。
方法经前期筛选、验证研究发现AIMAH与正常肾上腺组织相比存在microRNA差异表达,其中hsa-miR-663表达明显上调。2015年10月至2016年2月,将hsa-miR-663作为目标microRNA,合成相应的microRNA mimics及inhibitors,转染SW-13细胞。通过实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)确认hsa-miR-663在SW-13细胞中的转染效果。根据RT-PCR结果将经转染的细胞系分为5个组进行对比研究,分别为SW-13空白对照组、mimics阴性对照组、inhibitor阴性对照组、hsa-miR-663过表达组、hsa-miR-663敲低组,应用MTT法检测各组细胞的生长曲线,应用Annexin V-FITC/PI双染法检测各组细胞的凋亡。明确hsa-miR-663对SW-13细胞增殖及凋亡的影响。
结果采用RT-PCR确认,在mimics转染的细胞中,hsa-miR-663过表达;在Inhibitors转染的细胞中,hsa-miR-663表达敲低。MTT结果显示,与正常对照组及阴性对照组相比,hsa-miR-663过表达组细胞增殖明显,敲低组细胞增殖显著下降。Annexin V-FITC/PI双染法结果显示,与正常对照组及阴性对照组相比,hsa-miR-663过表达组细胞凋亡无明显变化,敲低组细胞凋亡轻度增加,差异无统计学意义(P>0.05)。
结论hsa-miR-663过表达可以促进SW-13细胞增殖,可能与AIMAH发病相关。