抗菌肽Magainin基因的克隆及其在Pichia pastoris中的表达

• 作 者: 陈海旭 邹冠玉 屈贤铭 杨胜利
• 机 构: 中国科学院上海生物工程研究中心
• 出 处: 中国生物化学与分子生物学报
• 发表日期: 2002年4期
• 关键词: 抗菌肽 Magainin基因 克隆 酶母表达 pPIC3 antibacterial peptide expression in Pichia pastori
• 基金项目: 国家高技术研究发展计划(863计划)

用化学合成法合成了以酵母偏爱密码子编码的抗菌肽magainin基因片段,合成片段拼接后,与pUC19重组,获得magainin基因.Magainin基因与酵母表达载体pPIC3重组,构建胞内表达载体pPIC3-Mag,电击法转化GS115宿主菌,经表型筛选和PCR鉴定证实了目的基因已稳定整合入Pichia pastoris酵母基因组中.阳性克隆用甲醇诱导表达,用免疫印迹法确定了产物的正确性.利用琼脂孔穴扩散法和液相测定法证明了重组magainin具有抗菌活性.