【摘 要】
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目的:荧光标记物是目前杂交型基因芯片所检测的主要目标底物,本实验比较了3种基于PCR的荧光标记方法在基因芯片检测中的应用效果.方法:荧光分子标记的引物或荧光分子修饰的核
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目的:荧光标记物是目前杂交型基因芯片所检测的主要目标底物,本实验比较了3种基于PCR的荧光标记方法在基因芯片检测中的应用效果.方法:荧光分子标记的引物或荧光分子修饰的核苷酸可以在PCR反应中通过Taq,Pfu等DNA聚合酶掺入到PCR产物中,在此过程中,荧光分子又可以通过不同的方法掺入到PCR产物中.方法1:直接将荧光分子化学合成在引物的5′端;方法2:在PCR反应体系中加入荧光分子修饰的核苷酸单体,由DNA聚合酶将其掺入PCR产物中;方法3:对PCR产物通过非模板依赖性的酶促加尾反应在其3′端随机加入荧光修饰的核苷酸.本实验优化了3种荧光标记方法,并以检测CYP3A4基因外显子5中4个核苷酸位点的探针微阵列为例,比较了检测效果.结果:在各自优化的实验条件下,从扩增、标记效率以及芯片杂交的信号强度、背景、分辨率等方面进行比较,3种方法得到的荧光标记样品无明显区别,但后两种方法操作过程复杂,使用成本高,对反应条件苛刻.结论:3种基于PCR扩增的荧光标记方法均可以提供优质的荧光标记探针或样品(底物),在实际应用中,各自有不同的特点及适用范围.
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