【摘 要】
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目的 对正常软骨中的软骨前体细胞进行分离、鉴定,并对不同浓度IL-1β对软骨前体细胞的成软骨分化影响进行研究.方法 取正常成年新西兰大白兔的软骨细胞,通过纤连蛋白粘连分
【机 构】
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苏州市吴江区第一人民医院骨科 江苏苏州,215200;南京医科大学附属南京医院骨科
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目的 对正常软骨中的软骨前体细胞进行分离、鉴定,并对不同浓度IL-1β对软骨前体细胞的成软骨分化影响进行研究.方法 取正常成年新西兰大白兔的软骨细胞,通过纤连蛋白粘连分离出软骨前体细胞,采用流式细胞仪对其细胞表型进行鉴定,倒置相差显微镜观察其克隆增殖,并行成骨、成脂、成软骨三系分化观察.培养软骨前体细胞团并分为4组,分别加入普通H-DMEM培养基(A组)、成软骨诱导分化培养基(B组)、成软骨诱导分化培养基+0.1 ng/mL IL-1β(C组)、成软骨诱导分化培养基+1.0 ng/mL IL-1β(D组),培养3周行组织学、生物化学、实时荧光定量PCR等检测,观察IL-1β的影响.结果 在正常软骨细胞中存在软骨前体细胞,经鉴定有干细胞表型阳性表达,有与干细胞相似的克隆增殖能力及分化能力.HE染色示,C、D组中细胞团块较B组明显减小,细胞呈肥大样改变.番红O、Ⅱ型胶原及X型胶原染色示,B组较A组染色深,C、D组均浅于B组,D组浅于C组.生物化学成分测定示,C、D组的总胶原、糖胺聚糖(glycosaminoglycan,GAG)相对含量及GAG/DNA比值均显著低于B组,D组显著低于C组,差异均有统计学意义(P＜0.05);C、D组DNA相对含量均显著高于B组(P＜0.05),但C、D组间差异无统计学意义(P＞0.05).实时荧光定量PCR检测示,C、D组Ⅱ型胶原、X型胶原、Sox-9mRNA相对表达量均显著低于B组,D组显著低于C组,差异均有统计学意义(P＜0.05);而C、D组Runx-2和MMP-13mRNA相对表达量均显著高于B组,D组显著高于C组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 在正常软骨组织中存在一种有干细胞特性的软骨前体细胞,其有克隆和潜在分化的能力.IL-1β对软骨前体细胞成软骨分化有抑制作用,并有促进成骨分化的可能.
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