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根据Genbank发表的牛支原体全基因序列，设计2对特异性引物，建立了诊断牛支原体肺炎的巢式PCR方法，第一轮引物P1、P2扩增片段长度为1912bp，第二轮引物P3、P4扩增片段长度为422bp：该方法特异性试验未扩增出丝状支原体丝状亚种小克隆和无乳支原体特异性条带；敏感性试验证明扩增DNA最低含量达到10—7Hg／mL，是单一PCR的10^3倍；用该方法对阳性病料进行检测，均扩增出特异性片段。该体系的成功构建，可以为牛支原体肺炎的活体检测，和流行病学调查提供技术支持。