【摘 要】
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目的:在HEK293细胞中获得Sirt3全长基因,构建其高效真核表达载体.方法:提取人HEK293细胞总RNA,反转录合成cDNA,以特异性引物扩增Sirt3全长基因并克隆入pcDNA3.1载体,筛选阳性
【机 构】
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陕西中医药大学,陕西咸阳,712046青岛大学附属医院,山东青岛,266003;
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目的:在HEK293细胞中获得Sirt3全长基因,构建其高效真核表达载体.方法:提取人HEK293细胞总RNA,反转录合成cDNA,以特异性引物扩增Sirt3全长基因并克隆入pcDNA3.1载体,筛选阳性克隆进行序列测定后,鉴定其表达情况.结果:PCR扩增得到特异性的约1000 bp的片段,序列测定结果表明与国外已发表的序列完全一致;将构建的pcDNA3.1-Sirt3质粒转入AGS和SGC-7901细胞,检测到Sirt3的mRNA和蛋白表达水平均提高.结论:构建获得Sirt3基因高效真核表达载体,将用于Sirt3的功能研究.
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