探讨过氧化物氧化还原蛋白-5(PRDX5)在丙泊酚减轻氯胺酮致神经细胞凋亡中的机制。
方法2018年3月至2019年1月，选择健康7 d龄Sprague-Dawley(SD)雄性幼鼠(北京维通利华实验动物公司)80只，将幼鼠随机分为4组(n＝20)，对照组腹腔注射0.9%生理盐水1 ml(对照组)，实验A组腹腔注射80 mg/kg氯胺酮1 ml(氯胺酮组)，实验B组腹腔注射80 mg/kg丙泊酚1 ml(丙泊酚组)，实验C组腹腔注射(80 mg/kg氯胺酮＋80 mg/kg丙泊酚)共1 ml(丙泊酚＋氯胺酮组)。大鼠苏醒后继续饲养3周后行跳台实验(n＝10)，测试完毕后处死取海马组织应用免疫组织化学检测PRDX5含量(n＝10)。体外培养条件下，采用孕18 d清洁级SD大鼠(北京维通利华实验动物公司，合格证编号为218764758)进行原代海马神经元培养，分4组：原代海马神经元细胞(DIV)＋蒸馏水组(DIV＋D组)、原代海马神经元细胞(DIV)＋氯胺酮组(DIV＋K组)、PRDX5基因沉默原代海马神经元细胞(silence-PRDX5 DIV)＋氯胺酮组(silence-PRDX5 DIV＋K组)及PRDX5基因过表达原代海马神经元细胞(overexpression-PRDX5 DIV)＋氯胺酮组(overexpression-PRDX5 DIV＋K组)，细胞培养至第8天，收集4组细胞，四唑氮化合物(MTS)检测细胞增殖，原位缺口末端标记法(TUNEL)法检测细胞凋亡率，实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)技术检测各组细胞PRDX5下游凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)在mRNA转录水平。组间比较采用t检验。
结果体内条件下，PRDX免疫组化显示，对照组[(72.2±0.4)%]、丙泊酚组[(55.3±0.1)%]、氯胺酮＋丙泊酚组[(42.6±0.3)%]、氯胺酮组[(17.5±0.2)%]，PRDX免疫组化阳性面积百分比依次减少(t＝2.110，P<0.05)。体外条件下，细胞凋亡率：silence-PRDX5DIV＋K组[(21.2±0.8)%]、DIV＋K组[(13.3±0.5)%]、overexpression-PRDX5DIV＋K组[(7.4±0.4)%]、DIV＋D组[(3.2±0.3)%]，细胞凋亡率依次降低(t＝1.520，P<0.05)。Real-time PCR技术检测显示：海马神经元细胞凋亡相关基因bcl-2在mRNA水平的表达情况，silence-PRDX5DIV＋K组(0.08±0.00)、DIV＋K组(0.03±0.00)、overexpression-PRDX5DIV＋K组(0.02±0.00)、DIV＋D组(0.01±0.00)，凋亡基因bcl-2的表达依次降低(t＝1.120，P<0.05)；海马神经元细胞凋亡相关基因bax在mRNA水平的表达情况，silence-PRDX5DIV＋K组(0.30±0.04)、DIV＋K组(0.20±0.02)、overexpression-PRDX5DIV＋K组(0.1±0.01)、DIV＋D组(0.06±0.00)，凋亡相关基因bax的表达量依次降低(t＝1.070，P<0.05)。
结论丙泊酚通过上调PRDX5的表达减轻氯胺酮麻醉中神经细胞的凋亡。