【摘 要】
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目的 探讨α1,3-半乳糖基转移酶(α1,3-GT)基因沉默对人自然杀伤(NK)细胞介导的异种细胞毒作用的影响.方法 将培养的永生化猪血管内皮细胞系细胞株PED分为3组.转染组:PED转染了特异性α1,3-GT 核糖核酸干扰分子(SiRNA-1);错配组:PED转染了错配的SiRNA;空转染组:PED未转染SiRNA.观察各组PED与人NK细胞系细胞株NK 92在静止和流动状态下的粘附作用、不同效
【机 构】
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430030,武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所国家教育部、卫生部器官移植重点实验室,430030,武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所国家教育部、卫生部器官移植
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目的 探讨α1,3-半乳糖基转移酶(α1,3-GT)基因沉默对人自然杀伤(NK)细胞介导的异种细胞毒作用的影响.方法 将培养的永生化猪血管内皮细胞系细胞株PED分为3组.转染组:PED转染了特异性α1,3-GT 核糖核酸干扰分子(SiRNA-1);错配组:PED转染了错配的SiRNA;空转染组:PED未转染SiRNA.观察各组PED与人NK细胞系细胞株NK 92在静止和流动状态下的粘附作用、不同效靶比下的NK92细胞毒作用以及PED和NK 92混和培养上清液中γ干扰素(IFN-γ)的水平.结果 PED转染后48 h,转染组、错配组和空转染组在静止状态下粘附NK92的数量(个)分别为262±26、275±24和252±23;流动状态下分别为132±12、125±15和110±20,无论是静止还是流动状态下,各组PED对NK92的粘附能力的比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).无论PED是否被活化,在相同效靶比下NK92对各组PED的杀伤率的比较,差异均无统计学意义(P＞0.05),但杀伤率与效靶比呈正相关.NK92与PED共孵育早期即有反应性IFN-γ分泌,其分泌水平[(366.9±28.7)ng/L]较其自发分泌水平[(60.1±6.4)ng/L]增加了5倍,在共孵育后12 h分泌值最高,但各组间不同时段IFN-γ分泌值的比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 利用RNA干扰技术下调PED上的α1,3-半乳糖残基(α-Gal)的表达,未引起NK92和PED相互作用的明显改变.α-Gal可能并非是NK细胞作用的靶位点,其表达量的高低对NK细胞的活化、粘附及杀伤能力未产生负性影响。
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