猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株ORF6基因的克隆与原核表达研究

• 作 者: 刘永宏 刘月焕 王凤龙 韩春华 林健 王金玲 杨龙峰 赵丽
• 机 构: 内蒙古农业大学动物科学与医学学院,北京市农林科学院畜牧兽医研究所,北京市延庆县动物卫生监督管理局,北京庄笛浩禾生物医学科技有限公司,内蒙古民族大学动物科技学院
• 出 处: 中国动物检疫
• 发表日期: 2009年7期
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒 变异株 ORF6基因 克隆 原核表达 Porcine reproductive and respiratory syndrome vir
• 基金项目: 北京市农林科学院青年基金项目（2007020122）、北京市科委猪高致病性蓝耳病防控技术子课题

根据GenBank中关洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的ORF6基因序列，设计合成一对特异性引物，应用RT-PCR方法扩增出PRRSV的ORF6基因（M基因）。将所扩增片段克隆入原核表达载体pET-32a（＋），pET—ORF6重组质粒转化DH5a宿主菌后，经双酶切、PCR鉴定后挑选阳性克隆测序鉴定并对插入的ORF6基因序列进行分析。结果表明，ORF6基因的原核表达载体构建成功。ORF6基因推导的氨基酸与美洲型相应基因的同源性为96．0％-100％，与LV株的同源性为79．9％，系统进化树表明该P