CRISPR/Cas9介导下敲除KNDC1的人脐静脉内皮细胞具有抗衰老能力

• 作 者: 孙靖玉 姚赫 胡刚 魏洁 郭君 张鑫 林雅军
• 机 构: 北京医院
• 出 处: 基础医学与临床
• 发表日期: 2020年9期
• 关键词: KNDC1 CRISPR/Cas9系统 基因编辑 脐静脉内皮细胞 KNDC1CRISPR/Cas9 systemgene editinghuman umbili
• 基金项目: 国家自然科学基金(81671391),中国医学科学院医学与健康科技创新工程(2018-I2M-1-002)

目的利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的KNDC1并观察其抗衰老能力。方法通过在线软件设计靶向于KNDC1外显子1、2、3的5个sgRNAs,并将其构建到CRISPR/Cas9载体中;经测序确认序列正确后,将重组质粒转染HeLa细胞和HUVECs,48 h后用real-time PCR和Western blot分别检测KNDC1 mRNA和蛋白表达水平;用SA-β-gal染色检测细胞衰老情况;用2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针检测细胞内活性氧