携带人白细胞介素18基因的复制缺陷型腺病毒载体的构建、鉴定和滴度测定

来源 :徐州医学院学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tangguorong
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目的构建人白细胞介素18(IL-18)基因复制缺陷型腺病毒表达载体。方法以质粒pJWIL—18为模板,设计并合成上、下游引物,利用多聚酶链反应(PCR)扩增获得IL-18基因片段,酶切后克隆至pCA13质粒,构建重组质粒pCA13IL—18。鉴定正确后,将pCA13 IL—18与含有腺病毒右臂的质粒pBHGE3共转染HEK293细胞,9-12天出现病毒空斑。提取重组腺病毒的DNA。进行PCR鉴定。大量扩增后,氯化铯梯度离心纯化腺病毒,测病毒滴度。结果酶切分析、序列测定、PCR验证表明,IL-18基因成功克
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