mTOR自噬信号通路和凋亡在DEHP致SD尿道下裂胎鼠中的改变

• 作 者: 黄方圆 周玥 沈炼桔 魏仪 龙春兰 唐向亮 李典 刘星 魏光辉
• 机 构: 400014 重庆医科大学附属儿童医院泌尿外科、儿童泌尿生殖发育与组织工程重庆市重点实验室、儿童发育疾病研究教育部重点实验室、儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地、儿科学重庆市重点实验室,400014
• 出 处: 中华小儿外科杂志
• 发表日期: 2018年39期
• 关键词: Hypospadias Apoptosis Autophagy Diethylhexyl Phthalate

目的

探讨邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯[Di(2-Ethylhexyl) Phthalate，DEHP]诱导大鼠发生尿道下裂的机制。

方法

20只成年孕SD鼠[10～12周龄，体重(240±20 g)]按照数字随机化法分为：正常对照组(n＝10)和DEHP暴露组(750 mg·kg^－1·d^－1)(n＝10)，于妊娠期(gestation day，GD)第8.5～18.5日每日灌胃，于GD19.5时剖宫取出胎鼠，以有无睾丸分辨雌雄，并在解剖显微镜下观察有无尿道下裂的发生。测量肛门生殖器距离(anogenital distance，AGD)和肛门生殖指数(anogenital index，AGI)，扫描电镜和HE染色观察阴茎组织形态改变，透射电镜观察阴茎组织内自噬的改变，western blot检测生殖结节(GTs)中自噬相关蛋白LC3、p62、Beclin1、Akt、mTOR、p-Akt、p-mTOR和凋亡相关蛋白cleaved-caspase3、Bax、Bcl2的表达水平，TUNEL法检测雄鼠GTs中细胞凋亡。

结果

DEHP暴露后出现尿道下裂，发生率为27.58%，尿道下裂组中AGD、AGI均明显降低(P<0.05)；尿道下裂雄鼠的GTs出现腹侧尿道缝融合障碍及尿道开口异位。尿道下裂组GTs中LC3和Beclin1的表达、LC3Ⅱ/Ⅰ比值增加(P<0.05)，p62、p-Akt^Ser473、p-mTOR^Ser2448表达明显减少(P<0.05)，Bcl2表达减少(P<0.05)，cleaved-caspase3和Bax蛋白表达水平则明显增高(P<0.05)，细胞凋亡显著增加(P<0.05)。

结论

DEHP作为一个外源性干扰物进入机体后，致使胎鼠的GTs中PI3K/Akt/mTOR信号通路被抑制，自噬水平增加，同时促凋亡与抗凋亡系统失衡，进一步促进自噬的发生，最终使得凋亡异常增加，导致尿道下裂的发生。