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目的
观察糖基化改造的骨髓基质干细胞(BMSCs)在骨缺损模型中的靶向迁移情况。
方法首先选用1只新西兰兔,2个月龄,体质量1.5 kg,进行BMSCs分离、提取、扩增;脂质体法将α-1,3岩藻糖基转移酶VI (FUT-6)基因转染BMSCs并筛选建立阳性克隆细胞株;ELISA法检测FUT-6基因转染的FUT-6/BMSCs和BMSCs的FUT-6表达量及唾液酸化路易斯寡糖(sLeX)生成量;流式细胞技术检测FUT-6/BMSCs和BMSCs与E、P选择素的结合力;12只新西兰兔骨缺损造模后分为2组(每组6只):采用FUT-6/BMSCs和BMSCs体外eGFP标记后静脉分别回输人两组相同骨缺损动物模型体内,术后6、12、24 h采用荧光显微镜观察骨缺损处髓腔组织中标记细胞数量,以评估靶向迁移情况。
结果BMSCs可体外培养扩增;FUT-6基因转染后的FUT-6/BMSCs高表达FUT-6,上调sLeX的生成量,差异有统计学意义(P < 0.05);流式细胞仪检测提示:与BMSCs比较,FUT-6/BMSCs与E、P选择素的结合力分别由15.0%、12.7%提高到68.9%、59.7%;术后6、12、24 h荧光显微镜观察FUT-6/ BMSCs在骨缺损处髓腔组织中的数量较BMSCs更多,差异均有统计学意义(P <0.05)。
结论糖基化改造的BMSCs具有明显靶向迁移至病损部位的能力。