【摘 要】
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目的 构建带有脊髓运动神经元特异性启动子HB9的人类TDP-43野生型和突变型的转基因小鼠模型,研究TDP-43突变导致肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)的机制
【机 构】
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哈尔滨医科大学组织学与胚胎学教研室哈尔滨医科大学胚胎与干细胞工程实验室
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目的 构建带有脊髓运动神经元特异性启动子HB9的人类TDP-43野生型和突变型的转基因小鼠模型,研究TDP-43突变导致肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)的机制.方法 构建pHB9 - hTDP -43Q331K,M337v - IRES- EGFP转基因的载体,通过受精卵原核注射的方法制备转基因小鼠.出生的后代利用PCR方法鉴定.免疫组织化学法观察转基因小鼠的脊髓运动神经元中TDP-43的定位及包涵体的形成.采用步态评估和悬挂实验观察转基因小鼠行为学的改变.结果 获得人TDP-43突变转基因小鼠,其运动神经元胞质中TDP-43染色阳性,未见TDP-43包涵体.小鼠行为学检测显示,转基因小鼠的步距与同龄正常小鼠相比明显下降(Q331K型小鼠同Ntg相比前后肢步距t值分别为6.05和5.15,M337V型小鼠同Ntg相比前后肢步距t值分别为10.71和9.91；P＜0.01)；步态宽度升高(Q331K型小鼠同Ntg相比前后肢步态宽度t值分别为-11.35和-2.73;M337V型小鼠同Ntg相比后肢步态宽度t=2.49;P＜0.05)；平衡抓握力明显下降(Q331K型小鼠同Ntg相比落地时间t=47.43；M337V型小鼠同Ntg相比落地时间t=26.35,P＜0.01).结论 利用HB9启动子可以获得在脊髓运动神经元特异性表达人TDP-43突变的转基因小鼠,TDP-43突变转基因小鼠运动神经元发生退行性改变.转基因小鼠前后肢步距、步态宽度及平衡抓握能力发生改变,结果显示脊髓运动神经元中过表达人TDP-43突变对小鼠的运动能力产生影响.
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