【摘 要】
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目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)诱导尤文肉瘤细胞株WE-68和VH-64凋亡及作用机制。方法:四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)测定细胞增殖抑制率。流式
【机 构】
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中国医科大学附属第一医院运动医学关节外科
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目(编号:30973021,81272946)
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目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)诱导尤文肉瘤细胞株WE-68和VH-64凋亡及作用机制。方法:四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)测定细胞增殖抑制率。流式细胞计数法测量TSA给药后细胞周期中sub-G1含量的变化。免疫印迹法(Western-blot)检测细胞中活化型多聚ADP核糖多聚酶(cleaved-PARP),p53-lys382残基乙酰化和p53蛋白总量的表达。实时定量PCR和siRNA转染技术测定p53多个下游基因的mRNA水平改变和p53表达下调对TSA诱导凋亡的影响。结果:TSA抑制了尤文肉瘤细胞的增殖,诱导细胞周期中sub-G1含量和凋亡终产物cleaved-PARP蛋白表达的增加。TSA给药后,p53-lys382残基乙酰化表达量呈浓度依存性增加,同时上调p53下游因子p21,mdm2,Bax和PUMA的mRNA水平。另一方面,p53蛋白表达的下调明显削弱了TSA介导的p21表达的上调和cleaved-PARP的产生。结论:组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA能够通过激活p53高乙酰化表达来恢复p53转录功能,从而诱导尤文肉瘤细胞株产生凋亡。
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