【摘 要】
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为进一步了解WNT4在三角帆蚌性别决定过程中的作用,通过RACE(Rapid-amplification of cDNA ends)技术克隆获得了三角帆蚌WNT4基因的全长cDNA,共1 560 bp,其中5'-UTR 396 bp,3
【机 构】
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上海海洋大学农业农村部淡水水产种质资源重点实验室,上海201306;上海海洋大学上海市水产养殖工程技术研究中心,上海201306;上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心,上海201306
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为进一步了解WNT4在三角帆蚌性别决定过程中的作用,通过RACE(Rapid-amplification of cDNA ends)技术克隆获得了三角帆蚌WNT4基因的全长cDNA,共1 560 bp,其中5'-UTR 396 bp,3'-UTR24 bp,开放阅读框(ORF)为1 140 bp,可以编码379个氨基酸,且该序列含有WNT家族特有结构域.对WNT4的氨基酸序列进行同源性分析后,发现该基因在物种间的进化关系和结构功能具保守性.通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析发现WNT4基因在三角帆蚌雌雄多个组织(外套膜、闭壳肌、鳃、性腺、斧足和肝)中均有表达,表明其参与了多样的生物学过程,在鳃、斧足和肝中表达量较高,在性腺、闭壳肌和斧足中雌雄间有显著性差异,且雌性三角帆蚌的性腺、闭壳肌表达量显著高于雄性.原位杂交结果显示,WNT4在雌性三角帆蚌的卵母细胞上有明显的杂交信号,推测WNT4基因与性别决定相关.
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