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目的：克隆北柴胡中可能参与柴胡皂苷生物合成的细胞色素P450酶基因，构建其过量表达载体，为通过转基因验证其功能奠定基础。方法：在454高通量测序获得5＇和3＇端部分cDNA序列的基础上，利用LD-PCR方法获得全长cDNA，根据全长cDNA序列设计含有酶切位点的PCR引物，利用高保真酶，以RNA反转录产物为模板PCR扩增细胞色素P450酶基因的开放读框，扩增产物与pEASY-T1 Simple载体连接，转化大肠杆菌DH5α；重组质粒pT1-P450经菌液PCR和酶切方法验证后测序，采用NCBI在线Blas