【摘 要】
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目的 研究pcDu6载体质粒介导的转化生长因子β1(TGF-β1)短发夹RNA(shRNA)对人血清白蛋白(HsA)致人肾近曲小管上皮细胞(HK2细胞)增殖,TGF-β1、结缔组织生长因子(CTGF)和纤连
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目的 研究pcDu6载体质粒介导的转化生长因子β1(TGF-β1)短发夹RNA(shRNA)对人血清白蛋白(HsA)致人肾近曲小管上皮细胞(HK2细胞)增殖,TGF-β1、结缔组织生长因子(CTGF)和纤连蛋白(FN)表达的影响,并探讨有关机制.方法 构建TGF-β1shRNA的pcDu6载体质粒,体外培养HK2细胞株.采用脂质体转染将表达TGF-β1 shRNA的pcDU6质粒载体(pcDU6-A1-A2和pcDu6-Bl-B2)分别导入实验组细胞.用HsA(5 g/L)刺激HK2细胞12 h或24 h.四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定细胞增殖水平.RT-PcR半定量分析HK2细胞中TGF-B1、CTGF和FN mRNA的表达水平;双抗夹心酶联免疫吸附法检测HK2细胞培养液中TGF-β1及FN蛋白质水平.结果 HK2细胞在HSA刺激下,其TGF-β1、CTGF及FN mRNA的表达明显上调,培养液中TGF-β1和FN的蛋白质含量亦明显升高(P＜0.05).与pcDu6空载体组比较,pcDU6载体质粒介导的TGF-β1 shRNA干扰组TGF-β1、CTGF及FNmRNA的表达明显下调(P＜0.05).TGF-β1 shRNA转染HK2细胞后12 h或24 h,细胞培养液中TGF-β1和FN蛋白质含量明显下降,HK2细胞增殖被部分抑制(P＜0.05).在细胞增殖、TGF-β1、CTGF及FN基因表达方面,TGF-β1 shRNA干扰组组间比较,以及pcDU6空载体转染组与HSA刺激组比较,差异均无统计学意义.结论 pcDU6载体质粒介导的TGF-β1 shRNA能够明显抑制HSA刺激下HK2细胞增殖TGF-β1、CTGF和FN基因的表达.HSA刺激HK2细胞增殖及CTGF和FN基因的过表达可能通过TGF-β1介导.
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