PML—RARα融合基因相关蛋白原核表达载体的构建、表达和纯化

• 作 者: 杜琴 蔡嘉镜 蒋春萍 徐磊 张国元 王东生
• 机 构: 川北医学院附属医院检验科,川北医学院医学检验系,川北医学院转化医学研究中心
• 出 处: 国际医药卫生导报
• 发表日期: 2017年13期
• 关键词: PML—RAR α融合基因 重组质粒 蛋白表达 蛋白纯化 急性早幼粒细胞白血病 抗 体制备 PML-RARα fusion gene Recombinant
• 基金项目: 川北医学院校级科研发展计划项目（CBY15-A-ZD07）

目的构建PML-RARα融合基因相关重组表达质粒，在大肠埃希菌中表达可溶性蛋白并进行纯化。方法利用聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）以PML-RARα全长质粒为模板分别扩增出长度均为1200bp的PML和RARα序列，并将它们分别插入PET32a（＋）质粒中，构建重组表达质粒，化学法转化大肠埃希菌DH5α进行克隆，菌落PCR筛选阳性转化子，双酶切和测序鉴定重组质粒的正确性。正确重组的表达质粒分别命名为PML-Flag-PET32a（＋）和Flag-RARα-PET3