【摘 要】
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目的 探讨EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白1(LMP-1)对鼻咽癌细胞在体内增殖和转移能力的影响及其可能的机制.方法 构建重组腺相关病毒(Raav)-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和Raav-shRNA-LM
【机 构】
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南方医科大学南方医院耳鼻咽喉头颈外科,广州,510515南方医科大学分子生物教研室;解放军第九四医院耳鼻喉科;
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目的 探讨EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白1(LMP-1)对鼻咽癌细胞在体内增殖和转移能力的影响及其可能的机制.方法 构建重组腺相关病毒(Raav)-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和Raav-shRNA-LMP-1载体.以不同滴度的Raav-EGFP转染鼻咽癌C666-1细胞,确定最佳转染复数(MOI).Raav-shRNA-LMP-1按MOI转染C666-1细胞,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定抑制效率.将体外转染RNA干扰后的C666-1细胞注入裸鼠肝脏包膜下建立鼻咽痛移植瘤模型,观察裸鼠的肝脏成瘤及肝脏、肺脏转移情况.采用免疫组化法检测基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达,分析LMP-1基因沉默对鼻咽癌细胞成瘤和转移能力的影响及机制.结果 Raav-EGFP以5×104病毒基因组数/细胞转染C666-1细胞,转染效率>95%.Raav-shRNA-LMP-1以5×104病毒基因组数/细胞转染C666-1后,LMP-1的表达抑制率>90%.Raav-shRNA-LMP-1转染组裸鼠的肝脏成瘤体积为(0.2527±0.1152)cm3,与Raav-EGFP转染组[(0.2533±0.0754)cm3]的差异无统计学意义(P>0.05),但Raav-sbRNA-LMP-1转染组裸鼠的肝转移率(50.0%)和肺转移率(33.3%)明显低于Raav-EGFP转染组(均P
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