表达西尼罗病毒E蛋白重组腺病毒的构建及鉴定

• 作 者: 张翠云 赵晶 陈韬 孙恩成 刘霓红 杨涛 徐青元 王文世 魏鹏
• 机 构: 湖南农业大学动物医学学院,湖南长沙410128中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室,黑龙江哈尔滨150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生
• 出 处: 中国预防兽医学报
• 发表日期: 2013年4期
• 关键词: 西尼罗病毒 E蛋白 重组腺病毒

为构建表达西尼罗病毒(WNV)E蛋白的重组腺病毒,本实验将WNV的E基因克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,经Pme Ⅰ酶切线性化后电转化于含有人5型缺陷腺病毒的骨架的BJ5183感受态大肠杆菌中进行同源重组,构建重组质粒pAd-WNV-E;将其经Pac Ⅰ酶切线性化后通过脂质体介导转染于人胚肾细胞Ad-293细胞,制备重组腺病毒rAd-WNV-E;经western blot以及间接免疫荧光鉴定表明WNVE蛋白在Ad-293细胞中获得有效表达.病毒滴度测定试验结果显示,该重组腺病毒与野毒型腺病毒复制能力相近.该重组腺病毒的构建为进一步研制表达WNVE蛋白的重组腺病毒的疫苗奠定了基础.