【摘 要】
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目的构建携带反义2型基质金属蛋白酶(MMP2)的重组腺病毒并探讨它对人肝癌细胞株HepG2侵袭细胞基底膜的抑制作用. 方法从新鲜肝癌组织中提取总RNA,用逆转录聚合酶链反应法合成
【机 构】
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成都,成都地奥制药集团有限公司新药部
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目的构建携带反义2型基质金属蛋白酶(MMP2)的重组腺病毒并探讨它对人肝癌细胞株HepG2侵袭细胞基底膜的抑制作用. 方法从新鲜肝癌组织中提取总RNA,用逆转录聚合酶链反应法合成MMP2 cDNA序列中5′端转录起始位点附近长约500bp的基因片段,将此片段反义克隆到腺病毒载体系统的多克隆位点,经转染293细胞包装生成携带反义MMP2基因的重组腺病毒Ad-MMP2AS;利用侵袭小室模型,检测Ad-MMP2AS对肝癌细胞株(HepG2细胞)体外侵袭能力的影响. 结果成功构建并生成携带反义MMP2基因片段的重组腺病毒Ad-MMP2AS,病毒滴度达1×108;体外细胞实验中Ad-MMP2AS能明显抑制HepG2细胞穿透人工重组基底膜的能力. 结论重组腺病毒介导反义MMP2基因可望有效抑制肝癌细胞的浸润和转移,为肝细胞癌的基因治疗提供新的方法.
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