【摘 要】
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在载体yy449的CaMV 35S minimal启动子序列与LUC基因序列之间增加Bgl Ⅱ限制性内切酶位点,构建yy621载体.用PCR的方法分别扩增CaMV35Sminimal启动子序列与LUC基因.引物设计要满足如下条件:CaMV 35S minimal启动子序列扩增片段的上游应包括BamH Ⅰ、下游应包括BglⅡ限制性内切酶位点;LUC基因序列扩增片段的上游应包括BglⅡ、下游应包括XbaⅠ限制性内切酶位点.以上两个片段先用BglⅡ限制性内切酶消化后进行连接,得到CaMV 35S minimal
【机 构】
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延边大学农学院,延吉,133002;延边大学附属医院,延吉,133000;岐阜大学,岐阜,5011193,日本
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在载体yy449的CaMV 35S minimal启动子序列与LUC基因序列之间增加Bgl Ⅱ限制性内切酶位点,构建yy621载体.用PCR的方法分别扩增CaMV35Sminimal启动子序列与LUC基因.引物设计要满足如下条件:CaMV 35S minimal启动子序列扩增片段的上游应包括BamH Ⅰ、下游应包括BglⅡ限制性内切酶位点;LUC基因序列扩增片段的上游应包括BglⅡ、下游应包括XbaⅠ限制性内切酶位点.以上两个片段先用BglⅡ限制性内切酶消化后进行连接,得到CaMV 35S minimal启动子序列与LUC基因序列之间含Bgl Ⅱ限制性内切酶的识别位点的片段,然后再用BamH Ⅰ和XbaⅠ限制性内切酶进行消化,插入到载体yy449的BamH Ⅰ和XbaⅠ酶切位点之间,替换原有的CaMV 35S minimal启动子序列与LUC基因序列.经菌落筛选、PCR鉴定和测序验证,阳性菌落中的CaMV 35S minimal启动子序列与LUC基因序列之间包含BglⅡ限制性内切酶的识别位点,载体yy621构建成功.本实验中构建的荧光素酶表达载体yy621,适于今后用抗性相关基因替换LUC基因,测定合成启动子对抗性相关基因的具体调控与赋予植物对不良环境的具体抗性表现,或者用全长启动子序列替换CaMV 35S minimal启动子序列(-46～+1),对进一步观察LUC基因的表达调控具有重要的意义.
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