【摘 要】
：
目的:探索FuGene 6介导重组质粒pIRES2-EGFP-hIGF-Ⅰ转染半月板细胞的转染条件.方法:切取成年山羊半月板,剪碎后Ⅱ型胶原酶消化,离心收集细胞.1×105/孔接种6孔细胞培养板,37
【机 构】
：
上海第二医科大学附属第九人民医院骨科,上海,200011;山东潍坊市中医院;山东大学药学院
论文部分内容阅读
目的:探索FuGene 6介导重组质粒pIRES2-EGFP-hIGF-Ⅰ转染半月板细胞的转染条件.方法:切取成年山羊半月板,剪碎后Ⅱ型胶原酶消化,离心收集细胞.1×105/孔接种6孔细胞培养板,37℃、5%CO2、饱和湿度培养.绘制生长曲线并行台盼蓝染色.用FuGene 6介导,将真核表达质粒pIRES2-EGFP-hIGF-Ⅰ转染第二代半月板细胞,设定2:1、3:1、3:2、6:1转染比例.分为透明质酸酶处理实验组和不处理对照组.又分为将混合物直接加入培养基或将培养基吸除后加入.在不同时间用倒置荧光显微镜观察EGFP的表达并计算转染效率.加入终浓度为100mg/L～600mg/L的G418培养基筛选.结果:半月板细胞形态为长梭形和多角形混合.转染后4h即有EGFP表达,至48h达高峰.各比例以3:1组最高;其次为6:1;2:1组与3:2组最低.用透明质酸酶处理的转染效率均略高于未处理组.将混合物直接加入培养基或将培养基吸除后加入混合物,两种方法效率无明显差异.400mg/L的G418终浓度符合筛选标准.筛选2周可形成阳性克隆.结论:利用FuGene 6可以有效介导重组质粒pIRES2-EGFP-hIGF-Ⅰ转染体外培养的半月板细胞,以3:1为最佳比例,采用透明质酸酶处理可以提高转染效率.
其他文献
随着社会的发展,涂料的应用越来越广泛,而大多数涂料都会挥发一些有毒的有机物,而解决这类问题的根本方法就是用水性涂料取代传统的溶剂型涂料.这篇文章详细阐述了国内水性涂
目的:分析不同时期余姚市城区巨大儿的发生情况、高危因素及妊娠结局。方法:将余姚市城区2001～2006年分娩巨大儿的孕妇与同期分娩4000g以下新生儿的孕妇分组比较。分别对孕前
北京举肢蛾(Beijinga utilaYang)以幼虫主要在国槐害虫槐花球蚧(Eulecanium kuwanai)和枣球蜡蚧(Eulecanium gigiantea)雌蚧壳下捕食卵,致使蚧虫卵量显著下降。该虫成虫于4月
[摘要]目的：探讨维吾尔族可摘局部义齿(Removable partial denture，RPD) 患者人格特征与满意度的相关性。方法：选择新疆医科大学第一附属医院口腔修复科就诊的129例维吾尔族患者为研究对象，就患者基本情况、艾森克人格类型及修复1 个月后满意度进行调查分析并对其结果进行总结分析。结果：维吾尔族可摘局部义齿修复患者年龄、性别、文化、对RPD相关知识的了解度、牙齿缺损数量均与RP
目的了解江苏省西尼罗病毒病潜在蚊媒群落构成及季节消长情况,为及时有效地切断西尼罗病毒病传播途径提供科学依据.方法2004年4～11月在江苏省苏州、镇江和连云港3市的城区和郊
目的:探讨新生儿窒息的相关因素,降低新生儿死亡率及致残率.方法:回顾性分析2006年1月～2007年12月90例新生儿室息的临床资料.结果:90例新牛儿窒息中,母体因素占80例,胎儿因素