杜氏盐藻MAPKK激酶基因DsMAPKKK的克隆、原核表达与纯化

• 作 者: 柴晓杰 刘艺琼 王逸云 武天祥 刘丽颖
• 机 构: 大连海洋大学/农业部北方海水增养殖重点实验室/辽宁省海洋生物资源恢复与生境修复重点实验室
• 出 处: 中国农学通报
• 发表日期: 2015年23期
• 关键词: 杜氏盐藻 DsMAPKKK 原核表达 纯化 蛋白印迹 Dunaliella salina DsMAPKKK prokaryotic expression
• 基金项目: 国家自然科学基金项目“杜氏盐藻PKC在盐胁迫信号传导中的功能研究”（31472260）,国家自然科学基金项目“盐藻中磷酸化转录因子对盐胁迫的分子响应”（30972240）.

为了进一步研究MAPKK激酶的生理功能，利用RT-PCR技术扩增了DsMAPKKK的开放阅读框序列，并利用T4连接酶与质粒pGS21a连接，构建了原核表达载体pGS21a-DsMAPKKK。将该重组质粒导入大肠杆茵BL21（DE3）感受态细胞，经IPTG诱导成功表达了融合蛋白。经SDS-PAGE检测，融合蛋白在上清和包涵体中均存在。可溶性蛋白经过GST柱纯化，电泳分析结果表明，在68kD左右有单一的蛋白条带，说明融合蛋白得到有效纯化。蛋白印迹结果显示在68kD左右有明显的杂交条带，初步证明纯化的蛋白就是带