高活性Co^2＋-替代海因酶中Co^2＋的定量及酶学活性鉴定

• 作 者: 张学尧 陈云霞 史鹏 梁爱华 袁静明
• 机 构: 教育部化学生物学与分子工程重点实验室,山西省长治医学院
• 出 处: 中国生物化学与分子生物学报
• 发表日期: 2008年5期
• 关键词: D-海因酶 Co^2+-海因酶 金属离子含量 酶活性鉴定 D-hydantoinase Co^2＋ -hydantoinase metal ion co
• 基金项目: 山西省自然科学基金资助项目（No.20031042）

利用产D-海因酶（HDT）的重组pE-hdt/E.coli菌株,在LB培养基中添加40μmol/L的Co^2＋,37℃培养10h,表达产物经Q-Sepharose阴离子交换剂和Phenyl-Sepharose疏水层析,获得电泳纯Co^2＋-D-海因酶（Co^2＋-HDT）.该酶对底物DL-海因的比活性较HDT高约6倍,达21.8U/mg.可见光光谱分析表明,在498nm和568nm处呈现Co^2＋-海因酶络合物的特征性吸收峰.用ICP-AES测定纯酶金属离子含量,HDT每摩尔亚基含0.93摩尔Zn^2＋和