【摘 要】
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目的评价半胱氨酸巯基氧化还原介导剂对人热休克转录因子1(hHSF1)的氧化还原状态、结构和功能的作用,并试图去解释氧化作用在细胞衰老中对hHSF1转录反应的影响. 方法通过改良的Western blot方法检测不同氧化还原介导剂对hHSF1构象的影响;通过凝胶电泳迁移率变动试验检测hHSF1的DNA的结合活性.结果促进二硫键交联的氧化型介导剂二酰胺(DM)、一氧化氮(NO+)载体亚硝基谷胱甘肽(G
【机 构】
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510080,广州市,中山大学附属第一医院中心实验室,DepartmentofCellBiologyandNeuroscience,RutgersStateUniversityofNewJersey.
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目的评价半胱氨酸巯基氧化还原介导剂对人热休克转录因子1(hHSF1)的氧化还原状态、结构和功能的作用,并试图去解释氧化作用在细胞衰老中对hHSF1转录反应的影响. 方法通过改良的Western blot方法检测不同氧化还原介导剂对hHSF1构象的影响;通过凝胶电泳迁移率变动试验检测hHSF1的DNA的结合活性.结果促进二硫键交联的氧化型介导剂二酰胺(DM)、一氧化氮(NO+)载体亚硝基谷胱甘肽(GSNO)与含hHSF1的HeLa细胞S100提取液预培育,能在体外形成一个致密的、电泳中移动快速、分子内二硫键交联的氧化型hHSF1(ox-hHSF1)单体构象;在电泳前加入还原型介导剂二硫苏糖醇(DTT)能完全逆转.由于ox-hHSF1形成,使hHSF1在体外不能被热诱导激活形成三体,失去和DNA结合的活性,而且这个作用仅对含半胱氨酸巯基的转录因子有特异性.结论hHSF1功能反应与其半胱氨酸巯基的氧化还原化学性能相关,氧化作用和hHSF1分子内二硫键交联有可能是衰老细胞热休克转录反应呈渐减性的原因.
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