【摘 要】
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为了建立一种简单、快速检测猪伪狂犬病病毒（PRV）野毒株的方法,试验原核表达gE蛋白,鉴定并纯化后免疫Balb/c小鼠,采集免疫Balb/c小鼠的脾脏进行细胞融合,筛选单克隆杂交瘤细胞株扩大培养。将阳性杂交瘤细胞免疫Balb/c雌性小鼠,小鼠腹部明显膨大后采集腹水,利用间接ELISA方法测定抗体效价;采用秋水仙素法对筛选到的阳性杂交瘤细胞进行染色体数目测定;利用SBAClonotypingTMSy
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为了建立一种简单、快速检测猪伪狂犬病病毒（PRV）野毒株的方法,试验原核表达gE蛋白,鉴定并纯化后免疫Balb/c小鼠,采集免疫Balb/c小鼠的脾脏进行细胞融合,筛选单克隆杂交瘤细胞株扩大培养。将阳性杂交瘤细胞免疫Balb/c雌性小鼠,小鼠腹部明显膨大后采集腹水,利用间接ELISA方法测定抗体效价;采用秋水仙素法对筛选到的阳性杂交瘤细胞进行染色体数目测定;利用SBAClonotypingTMSystem/HRP亚类鉴定试剂盒鉴定单克隆抗体亚类;利用Western-blot方法鉴定单克隆抗体活性;利用得到的单克隆抗体制备胶体金免疫层析试纸条,考察胶体金免疫层析试纸条的特异性、敏感性、重复性,进行符合性试验、临床应用试验。结果表明:获得了以包涵体形式表达的重组gE蛋白,Western-blot检测具有良好的免疫学活性;以重组gE蛋白为免疫原制备了3株抗PRV gE蛋白单克隆抗体4C8、5D10、6E8,其注射小鼠后产生的腹水抗体效价分别为1∶512 000、1∶1 024 000、1∶512 000,Western-blot检测均具有良好的免疫学活性;杂交瘤细胞4C8、5D10、6E8的染色体数分别为1×10~5、1×10~6、1×10~6,均接近脾细胞和骨髓瘤细胞染色体数的总和。分别以5D10和6E8为标记抗体和检测抗体,组装了检测PRV野毒株的胶体金免疫层析试纸条,用试纸条检测PRV疫苗株、PPV、PCV-2、CSFV、PRRSV、TGEV的结果均为阴性,对PRV野毒株的最低检出量为1×102.83 TCID50,批内和批间重复检测的结果完全相同,与PCR方法的符合率达92.59%,检测157份临床病料样品的阳性率为17.83%。说明胶体金免疫层析试纸条具有良好的特异性、敏感性、重复性,适合基层养殖单位进行PRV野毒的快速鉴别诊断。
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