【摘 要】
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目的:明确支原体污染对HEK-293细胞质粒DNA转染效率的影响,并从支原体对细胞精氨酸代谢的角度探究其机制。创新点:支原体是细胞培养中的常见污染源。HEK-293是目前常用的生产
【机 构】
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Department of Traditional Chinese Medicine, Changhai Hospital, Second Military Medical University;
【出 处】
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Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biote
【基金项目】
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Project supported by the National Natural Science Foundation of China(No.81803929);the Changhai Hospital Fund for Young Scholars(No.CH201810),China
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目的:明确支原体污染对HEK-293细胞质粒DNA转染效率的影响,并从支原体对细胞精氨酸代谢的角度探究其机制。创新点:支原体是细胞培养中的常见污染源。HEK-293是目前常用的生产蛋白、包装病毒的常用细胞系。然而,目前支原体污染对于质粒DNA转染效率的影响未见报道。本研究首次报道支原体污染对HEK-293细胞质粒DNA转染效率的影响,并揭示其机理。方法:采用4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)和聚合酶链反应(PCR)方法鉴定HEK-293细胞中的支原体污染情况以及支原体抗生素Plasmocin对支原体污染的清除效果。通过聚乙烯亚胺(PEI)方法对支原体污染的HEK-293细胞及支原体清除后的HEK-293细胞转染质粒,比较转染效率差异。通过高效液相色谱法(HPLC)分析支原体污染的和支原体清除后的HEK-293细胞的细胞裂解产物和细胞上清中的L-精氨酸、瓜氨酸含量变化。在支原体污染的HEK-293细胞中补充L-精氨酸,观察质粒转染效率的改变情况。结论:支原体污染能大大降低HEK-293细胞中质粒DNA的转染效率,且其原因与支原体能耗竭细胞中的L-精氨酸有关。
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