RNA干扰沉默高迁移率族蛋白B1的表达对结直肠癌LoVo细胞增殖和侵袭的抑制作用

• 作 者: 李增军 王海鹏 宋宝 孙燕来 徐忠法 韩建军
• 机 构: 250117 济南，山东省肿瘤医院 山东省肿瘤防治研究院普外科,济南大学 山东省医学科学院,山东省肿瘤防治研究院基础研究中心,250117 济南，山东省肿瘤医院 山东省肿瘤防治研究院普外科,25011
• 出 处: 中华肿瘤杂志
• 发表日期: 2015年37期
• 关键词: 结直肠肿瘤 高迁移率族蛋白B1 LoVo细胞 RNA干扰 肿瘤侵袭 肿瘤转移 裸鼠

目的

探讨小分子RNA(siRNA)干扰高迁移率族蛋白B1(HMGB1)基因的表达对结直肠癌细胞株LoVo增殖和侵袭的抑制作用。

方法

采用慢病毒介导的RNA干扰技术沉默HMGB1的表达，以逆转录聚合酶链反应和Western blot法检测干扰后LoVo细胞中HMGB1 mRNA和蛋白的表达情况。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞术、Transwell小室实验、细胞划痕实验及裸鼠成瘤实验，分析HMGB1基因沉默对LoVo细胞生长、增殖、侵袭及转移的影响。

结果

慢病毒介导siRNA可成功转染结直肠癌细胞株LoVo。HMGB1–siRNA转染组LoVo细胞中HMGB1 mRNA和蛋白的相对表达水平分别为0.24±0.04和0.21±0.03，阴性对照组分别为0.82±0.13和1.15±0.18，空白对照组分别为0.93±0.15和1.21±0.20；HMGB1–siRNA转染组HMGB1 mRNA和蛋白的表达水平均明显低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。MTT法检测结果显示，HMGB1–siRNA转染组LoVo细胞的生长速度较阴性对照组和空白对照组降低(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示，HMGB1–siRNA转染组LoVo细胞的增殖指数为38.27±1.32，明显低于阴性对照组(54.66±1.74)和空白对照组(57.43±1.29，P<0.05)。Transwell小室实验显示，HMGB1–siRNA转染组穿膜细胞数为(14.0±3.5)个/高倍视野，明显低于阴性对照组[(51.0±6.7)个/高倍视野]和空白对照组[(68.0±5.3)个/高倍视野，P<0.05]。细胞划痕实验显示，划痕后培养48 h时，HMGB1–siRNA转染组LoVo细胞的迁移距离为(83.61±23.21)μm，明显低于阴性对照组[(202.86±46.46)μm]和空白对照组[(214.58±57.38)μm，P<0.05]。裸鼠成瘤实验显示，21 d后，肿瘤最终体积为(521±34)mm³，明显小于阴性对照组[(763±46)mm³]和空白对照组[(802±51)mm³，P<0.05]。

结论

慢病毒介导的RNA干扰技术可有效抑制结直肠癌LoVo细胞中HMGB1基因的表达，HMGB1基因沉默可使结直肠癌细胞生长缓慢，增殖周期延长，侵袭与迁移能力明显下降，裸鼠移植瘤的生长受到明显抑制。