【摘 要】
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为研究猪霍乱沙门菌C500（S.C500）运载猪瘟病毒（CSFV）新型基因疫苗口服免疫家兔的体内免疫应答特点,采用电转化法将CSFV新型基因疫苗转化到S.C500,构建重组工程菌,口服免疫接种家
【机 构】
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四川农业大学动物生物技术中心,四川农业大学动物疫病与人类健康四川省重点实验室,成都市产品质量监督检验院
【基金项目】
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国家科技支撑计划资助项目（2006BAD06A18）, 教育部长江学者和创新团队发展计划资助项目（IRTO848）
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为研究猪霍乱沙门菌C500（S.C500）运载猪瘟病毒（CSFV）新型基因疫苗口服免疫家兔的体内免疫应答特点,采用电转化法将CSFV新型基因疫苗转化到S.C500,构建重组工程菌,口服免疫接种家兔,检测CSFV、S.C500特异性抗体;并用猪瘟兔化弱毒疫苗及猪伤寒沙门菌野毒株依次进行攻毒试验。结果显示,成功构建CSFV新型基因疫苗重组菌S.C500/pCB-ME2-IL-15,S.C500/pCC-ME2-IL-15。口服免疫家兔可以诱导产生抗CSFV和S.C500的特异性ELISA抗体,且S.C500/
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参照GenBank发表的PCV2ORFl基因序列设计了1对引物，利用PCR地高辛探针合成的方法制备了长度为494bp的特异性探针，经检验具有良好的特异性和敏感性，可检测最低质粒DNA质量浓度为0
采用实时荧光定量PCR技术检测透明质酸接合蛋白（HABP4）基因在大白猪和莱芜猪2种杂交子代背最长肌组织中的表达水平差异情况。试验结果表明,HABP4基因在所检测的背最长肌组织中
不同时间段采集猪的血液样本，利用ELISA方法检测血清和细胞培养上清中IL-12、IL-10、TNF-α等3种细胞因子的水平，分析猪双重免疫CSFV、PRRSV弱毒苗后血清和细胞培养上清中细胞
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利用DNAMAN软件对GenBank登录的伪狂犬病病毒（PRV）各毒株gB基因序列进行比对分析,选择其保守区域设计合成特异性的引物和TaqMan探针,同时利用普通PCR技术扩增获得全长的伪狂犬
将猪IL2基因和PPV VP2基因、PCV2 ORF2截短基因克隆至真核表达载体pCI-neo,构建了重组质粒pCI-ORF2-VP2和pCI-IL2,用脂质体介导法将pCI-ORF2-VP2质粒转染PK15细胞,采用间接免
从含有猪瘟病毒（CSFV）Shimen株E2全长基因的重组质粒pMD18-T-E2上扩增得到带有BamHⅠ酶切位点的E2基因片段,构建重组克隆质粒pMD19-T-E2。用BamHⅠ酶切pMD19-T-E2和＂自杀性＂DNA疫
为了研究高致病性PRRSVNSP1蛋白的免疫作用，本研究将高致病性PRRSVNSP1重组腺病毒（rAd—NSP1）接种体外培养的猪肺泡细胞（PAM），用实时荧光定量PCR和ELISA方法分别检测IFN-γ和IL-10
采用RT-PCR方法成功扩增了H3N2亚型猪流感病毒（Swine influenza virus,SIV）四川分离株（A/Swine/Sichuan/01/2006）的NS1基因,将其克隆于原核表达载体pET-32a（＋）中,构建了重组质粒pET3
将19头PCV2和PRRSV血清抗体阴性的普通断奶仔猪分为对照组（4头）和攻毒组（15头）,攻毒组每头仔猪滴鼻接种PCV2病毒悬液4mL（5×105 TCID50/mL）并用KLH刺激,分别在攻毒后14、21、35