【摘 要】
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目的 构建永生化大鼠星形胶质细胞,为转基因细胞移植镇痛提供细胞载体。方法采用差速粘附法体外分离和培养大鼠大脑皮层星形胶质细胞。利用脂质体将含有猿肾病毒40大T抗原(SV
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学研究室,华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学研究室,华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学研究室,华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学研究室,华中科技
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目的 构建永生化大鼠星形胶质细胞,为转基因细胞移植镇痛提供细胞载体。方法采用差速粘附法体外分离和培养大鼠大脑皮层星形胶质细胞。利用脂质体将含有猿肾病毒40大T抗原(SV40Tag)基因的质粒pCMVSV40T／PUR转染培养的大鼠星形胶质细胞。经嘌呤霉素1.5μg/ml筛选后,挑选阳性细胞克隆扩大培养并连续传代。PCR、RT-PCR及免疫组化检测阳性细胞克隆中SV40Tag基因的整合情况及其表达,并对传代细胞的胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)进行检测。结果成功获得体外培养的大鼠星形胶质细胞,GFAP阳性表达;筛选获得阳性细胞克隆,连续传代培养近50代;PCR、RT-PCR产物经1.5％琼脂糖凝胶电泳分析显示558bp处有一特异性扩增条带,与阳性对照条带相同,而未转染pCMVSV40T／PUR的细胞无扩增条带,回收片段经测序、比对与SV40Tag的基因序列一致(100％);同时转染的阳性细胞克隆SV40Tag和GFAP免疫染色阳性。结论 成功地构建了SV40Tag基因永生化的大鼠星形胶质细胞株。
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