【摘 要】
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目的:克隆人FOXP3 cDNA, 构建其原核表达载体, 在大肠杆菌中表达.方法:从新生儿脐带血获得FOXP3 mRNA, 用巢式RT-PCR技术扩增FOXP3 cDNA, 产物纯化后T-A克隆连接至pMD18-T载
【机 构】
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第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心
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目的:克隆人FOXP3 cDNA, 构建其原核表达载体, 在大肠杆菌中表达.方法:从新生儿脐带血获得FOXP3 mRNA, 用巢式RT-PCR技术扩增FOXP3 cDNA, 产物纯化后T-A克隆连接至pMD18-T载体, 构建其原核表达载体pRSET-A-FOXP3, 转化大肠杆菌BL-21(DE3)pLysS, IPTG诱导, 表达产物经SDS-PAGE及Western blot检测和鉴定.结果:获得FOXP3 mRNA, 并对其编码区cDNA序列进行扩增.PCR产物连接至原核表达载体pRSET, 经DNA测序, 证实与GenBank中的人FOXP3编码序列一致.经SDS-PAGE及Western blot显示在相对分子质量(Mr)约为52 000处出现融合表达条带, 表达量约占菌体蛋白总量的20%.结论:成功地克隆人FOXP3 cDNA, 构建了其原核表达载体, 并在大肠杆菌中得到有效表达.
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