【摘 要】
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目的 探讨针对人宫颈癌基因(HCCR)反义核苷酸影响肝癌细胞增殖、凋亡的作用.方法 构建pcDNA3.1-HCCR反义真核表达质粒,转染HepG2细胞,实时定量PCR检测HCCR mRNA表达水平,West
【机 构】
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430030,武汉市,华中科技大学同济医学院附属同济医院实验医学研究中心430030,武汉市,华中科技大学同济医学院附属同济医院临床免疫研究室;430030,武汉市,华中科技大学同济医学院附属同济医院
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目的 探讨针对人宫颈癌基因(HCCR)反义核苷酸影响肝癌细胞增殖、凋亡的作用.方法 构建pcDNA3.1-HCCR反义真核表达质粒,转染HepG2细胞,实时定量PCR检测HCCR mRNA表达水平,Western blot检测其蛋白表达水平,流式细胞仪观察HepG2细胞凋亡和细胞周期的变化,MTT法检测细胞的增殖活性.结果 HCCR反义核酸可有效抑制HepG2细胞HCCR的表达,与转染前相比,转染后24小时HCCR mRNA水平下降到16%,其蛋白表达水平在24小时也明显降低.对细胞的增殖与凋亡活性检测显示:转染HCCR反义质粒后,HepG2细胞增殖受到抑制,转染后24小时抑制率为47.62%(P＜0.05),细胞凋亡率为14.34%±0.91%,较对照组明显增多(t=21.799,P＜0.05),细胞分裂多停止在G0G1期.结论 HCCR反义核酸可以抑制HepG2细胞中HCCR的表达,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,使细胞停滞于G1期.HCCR反义核酸用于肝癌细胞的基因治疗具有一定的潜在意义.
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