【摘 要】
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目的探讨鼻息肉成纤维细胞在常氧与低氧环境下的原代培养及鉴定,以备后续研究其生物学特性。方法取2012至2013年行鼻内镜下鼻息肉切除的息肉组织20例。标本放入4℃无菌的PBS
【基金项目】
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山东省科技攻关项目(2010G0020236)
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目的探讨鼻息肉成纤维细胞在常氧与低氧环境下的原代培养及鉴定,以备后续研究其生物学特性。方法取2012至2013年行鼻内镜下鼻息肉切除的息肉组织20例。标本放入4℃无菌的PBS溶液中,在超净台中反复冲洗、浸泡,剪成1~2 mm大的组织块后,分成2份转入EP管中,分别用0.1%Ⅰ型胶原酶和1 mL的dispaseⅡ酶消化过夜。次日取出,轻轻吹打,进行计数后,加入培养液(DMEM+10%胎牛血清+1×105U/L青霉素+100 mg/L链霉素),分别置于常氧、低氧条件下培养(常氧培养以空气作为混合气体,氧体积分数约为20%;低氧培养则以氮气作为混合气体,调节氧体积分数为5%。二者其他培养条件相同,均为37℃、含体积分数为5%的CO2和饱和湿度)。在倒置相差显微镜下观察细胞的形态、增殖及生长状况、有无污染。用CCK-8比色法检测细胞的增殖,描绘生长曲线。结果 dispaseⅡ酶消化组的细胞数目高于Ⅰ型胶原酶消化组,两组之间差异有统计学意义(P<0.05)。鼻息肉成纤维细胞在常氧及低氧条件下培养的生长曲线无明显差异。结论 dispaseⅡ酶消化的细胞数目较多,是一种较好的获得细胞的方法。在常氧及低氧条件下均可建立稳定、可靠的人鼻黏膜成纤维细胞原代培养模型,可为鼻息肉的相关研究提供良好的细胞系。
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