【摘 要】
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目的以pTXB1作为融合表达载体,构建人胰岛素突变体(M-insulin)的基因表达克隆,表达及纯化.方法基因合成胰岛素突变体的cDNA序列,酶切后装入融合表达质粒pTXB1,基因测序正确后
【机 构】
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山西医科大学生物化学与分子生物学教研室,太原,030001协和医科大学基础研究所;
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目的以pTXB1作为融合表达载体,构建人胰岛素突变体(M-insulin)的基因表达克隆,表达及纯化.方法基因合成胰岛素突变体的cDNA序列,酶切后装入融合表达质粒pTXB1,基因测序正确后转化大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达,初步纯化.结果融合蛋白的分子量约为33 000,表达量占菌体总蛋白的50%以上.融合蛋白主要以包涵体的形式存在,洗涤包涵体后融合蛋白的纯度达到85%以上.Western-blot表明表达蛋白具有胰岛素抗原活性.活性测定显示,每升诱导培养后的菌液表达产物中,具有的放射免疫活性为0.5 U.结论成功地构建了人胰岛素突变体的融合表达体系,为进一步的研究奠定了基础.
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