赖型钩端螺旋体017株外膜蛋白新基因ompL17基因靶向敲除及其突变株的构建

• 作 者: 张会东 鲍朗 赵计林 朱庆平 李娅莎
• 机 构: 610041 成都，四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室,610041 成都，四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室,610041 成都，四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室,6
• 出 处: 中华微生物学和免疫学杂志
• 发表日期: 2005年25期
• 关键词: 钩端螺旋体 基因打靶 ompL17基因 突变株

目的

将外膜蛋白新基因ompL17靶向敲除并构建该基因的突变株。

方法

提取钩端螺旋体017株基因组DNA，扩增出外膜蛋白新基因ompL17，与打靶载体p2NIL重组，并插入氨苄抗生素抗性基因Amp^r+使外膜蛋白新基因ompL17失活，构建重组的基因打靶质粒p2NIL17A。电穿孔转化入钩体017株中构建突变株，通过豚鼠模型观察该突变株的毒力变化。

结果

PCR、Dot blot和酶切分析，证实构建了以氨苄青霉素抗性基因DNA为标记探针的基因打靶载体，并构建外膜蛋白新基因ompL17敲除的钩体017株突变株。

结论

成功将钩体外膜蛋白的新基因ompL17进行靶向敲除，并构建钩体017株突变株，为进一步进行该基因的功能研究和阐明赖型钩体致病的分子机制奠定了基础。