微小牛蜱Bm91基因的克隆及在毕赤酵母中的表达

• 作 者: 王玙 罗建勋 马米玲 关贵全 李有全 刘爱红 任巧云 刘军龙
• 机 构: 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室
• 出 处: 中国兽医科学
• 发表日期: 2008年7期
• 关键词: 微小牛蜱 Bm91基因 分泌表达 Boophilus microplus Bm91 gene secretory expression
• 基金项目: 国家“十一五”高技术研究发展计划（863）项目（2006AA10A207）,国家自然科技资源共享平台项目（2005DKA21100）,国家“十一五”科技支撑计划项目（2007BAD40806）,科技部欧盟项目,中国农业科学院杰出人才基金项目,欧盟EPIZONE、ICTTD3（INC0510561）项目,SSA-INCOME项目.

从我国半饱血微小牛蜱雌性成蜱肠道和唾液腺中提取总RNA；参照GenBank中已发表的微小牛蜱Bm91基因的核苷酸序列，设计了1对特异性引物。采用RT～PCR技术扩增Bm91基因，测序正确后将其亚克隆到巴斯德毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K的EcoRⅠ酶切位点，构建重组表达载体pPIC9K—Bm91。再次测序正确后将其用SacⅠ内切酶线性化，电转化毕赤酵母Gs115并经G418抗性筛选高拷贝重组菌株后用甲醇诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和Western-blot分析，结果显示，Bm91基因获得了成功