【摘 要】
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目的 研究长链非编码RNA NEAT1在哮喘中的作用及其相关机制.方法 将人气道平滑肌细胞(ASMCs)分为对照组(常规培养,不做处理),模型组[用血小板活化因子(PAF)处理ASMCs 12 h],转染组1(转染空载质粒24 h后,给予PAF处理12 h),转染组2(转染NEAT1过表达质粒24 h后,给予PAF处理12 h).通过实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测NEAT1和微小RNA-221-3p(miR-221-3p)的表达.用酶联免疫吸附(ELISA)法检测白细胞介素-1β(IL
【机 构】
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河南省中医院、河南中医药大学 第二附属医院肺病科,河南 郑州450000
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目的 研究长链非编码RNA NEAT1在哮喘中的作用及其相关机制.方法 将人气道平滑肌细胞(ASMCs)分为对照组(常规培养,不做处理),模型组[用血小板活化因子(PAF)处理ASMCs 12 h],转染组1(转染空载质粒24 h后,给予PAF处理12 h),转染组2(转染NEAT1过表达质粒24 h后,给予PAF处理12 h).通过实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测NEAT1和微小RNA-221-3p(miR-221-3p)的表达.用酶联免疫吸附(ELISA)法检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度;比较各组ASMCs之间的单层通透性;用生物信息学和双荧光素酶报告基因实验验证NEAT1和miR-221-3p之间的相关性.结果 对照组、模型组、转染组1和转染组2的ASMCs中NEAT1 mRNA的表达水平分别为1.00±0.00,1.54±0.07,1.50±0.13和2.12±0.13;miR-221-3p的表达水平分别为1.00±0.00,0.55±0.02,0.62±0.04和0.34±0.03;IL-1β分别为(1.57±0.09),(6.48±0.37),(6.16±0.55)和(15.21±0.98)pg·mL-1;IL-6分别为(153.51±8.37),(753.41±49.86),(712.79±83.83)和(1179.52±85.86)pg·mL-1;TNF-α分别为(9.94±0.56),(28.33±1.13),(26.52±0.90)和(54.86±3.74)pg·mL-1;ASMCs的单层通过率分别为(4.44±0.21)％,(8.43±0.39)％,(8.27±0.47)％和(16.54±0.78)％.对照组与模型组,转染组1和转染组2相比,差异均有统计学意义(均P<0.05).生物信息学和双荧光素酶报告基因检测实验结果表明NEAT1可以靶向调控miR-221-3p(P<0.05).结论 NEAT1通过靶向miR-221-3p加重了哮喘气道炎症和细胞屏障损伤.
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