【摘 要】
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目的 构建针对BALB/C小鼠H-2Kd基因siRNA表达质粒,观察其在小鼠LAK细胞的表达,为进一步研究H-2Kd基因功能奠定基础.方法 设计siRNA干涉靶序列,体外合成两段互补的寡核苷酸,通
【机 构】
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山东大学齐鲁医院检验科,济南,250012;山东省济南市卫生学校免疫学教研室,济南,250022
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目的 构建针对BALB/C小鼠H-2Kd基因siRNA表达质粒,观察其在小鼠LAK细胞的表达,为进一步研究H-2Kd基因功能奠定基础.方法 设计siRNA干涉靶序列,体外合成两段互补的寡核苷酸,通过与线性化的pSi-lencer 3.0-H1连接,转化大肠杆菌DH5a扩增纯化得到所需质粒,通过琼脂糖凝胶电泳及基因测序鉴定其分子量及插入片段的序列.采用siRNA表达质粒封闭小鼠LAK细胞MHC-1(H-2Kd)的表达,同时设空转染组和无关序列组,流式细胞术检测不同组剐靶蛋白的表达.结果 纯化的质粒分子量为2.8Kb,插入的寡核苷酸序列与设计的序列完全相符,流式细胞术检测证实siRNA能够抑制靶蛋白的表达.结论 成功构建了针对H-2Kd基因的siRNA表达质粒并抑制了其表达.
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