受体相互作用蛋白3介导的可控性坏死信号通路在创伤性脑损伤中的作用

• 作 者: 于泽奇 衣泰龙 涂悦 杨小飒 徐忠伟 张赛 程世翔
• 机 构: 300162 天津，武警后勤学院附属医院脑科医院、天津市神经创伤修复重点实验室、武警部队脑创伤与神经疾病研究所,300162 天津，武警后勤学院附属医院脑科医院、天津市神经创伤修复重点实验室、武警部队
• 出 处: 中华行为医学与脑科学杂志
• 发表日期: 2016年25期
• 关键词: Receptor-interacting protein 3 Traumatic brain injury Regulated necrosis

目的

探讨受体相互作用蛋白3(RIP3)介导的可控性坏死信号通路在创伤性脑损伤(TBI)中的作用机制。

方法

采用Bioflex细胞培养板接种小鼠海马神经元HT-22细胞，应用细胞损伤控制仪建立TBI细胞模型(阀门压力30 PSI、气体脉冲压力3.5～4.5 PSI、气体脉冲时间50 ms)。分别采用数字全息显微镜和免疫印迹技术检测细胞损伤后6 h、12 h和24 h细胞形态改变及RIP3、MLKL、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR蛋白表达变化。应用电子控制性皮质撞击仪(eCCI)建立小鼠TBI模型，对顶叶大脑皮质进行精确撞击(速率5 m/s、时间150 ms、深度1 mm)，假手术组仅开骨窗不行撞击。采用免疫组织化学法检测伤后12 h脑组织中上述蛋白的表达变化。

结果

体外实验结果表明，与对照组比较，CIC损伤6 h后HT-22细胞平均面积由[(603.63±26.13)μm²]降至[(193.87±10.51)μm²](P<0.01)，平均厚度由[(3.90±0.24)μm]升至[(7.50±0.27)μm](P<0.01)；损伤6～12 h后RIP3、MLKL和Akt表达显著升高[RIP3：(1.08±0.05)；MLKL：(0.99±0.03)；Akt：(0.97±0.02)，均P<0.01]并持续较高水平，损伤24 h后降低；p-Akt表达水平持续升高，至24 h后达到峰值[(1.07±0.03)，P<0.01]；损伤6 h后mTOR和p-mTOR表达明显升高[mTOR：(0.78±0.02)；p-mTOR：(0.95±0.02)，均P<0.01]。体内实验结果证实，CCI小鼠脑皮质区上述蛋白阳性细胞数明显高于Sham组[RIP3：(497±16) vs (324±11)；MLKL：(403±12) vs (200±8)；Akt：(367±10) vs (302±14)；p-Akt：(376±10) vs (287±17)；mTOR：(144±9) vs (57±11)；p-mTOR：(203±7) vs (27±8)，均P<0.01]，与细胞水平的WB检测结果一致。

结论

RIP3介导的可控性坏死信号通路可能在TBI后的继发性脑损害中起重要作用，RIP3有可能成为临床TBI靶向药物治疗的潜在生物标志物。