溶菌酶活性测定方法的改进及其在重组人溶菌酶质量标准建立中的应用

• 作 者: 宋纯艳 张拓 侯利平 原剑 黄亚娟 韩治国 刘曙晨 甄蓓 魏
• 机 构: 中南大学药学院,军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京蛋白质组研究中心,北京正旦国际科技有限责任公司
• 出 处: 分析测试学报
• 发表日期: 2014年8期
• 关键词: 重组人溶菌酶 比浊法 双直线法 Lowry法 recombinant human lysozyme turbidimetry double line metho
• 基金项目: 国家高技术研究发展计划863项目（2012AA020205,2014AA020906）,国家科技部重大仪器专项（2012YQ18011710）,国家科技部传染病重大专项（2013ZX10002009-001-001）

获得一种趋于均相反应体系的比浊法,用于重组人溶菌酶活性的研究,并建立相关操作规程和质量标准.通过显微计数法进行底物菌液质控,改进酶与菌液的混合方式和最佳酶用量,采用“双直线法”优化反应计时区间,并精确测定重组人溶菌酶含量.显微镜菌体计数法确定0.3 mg/mL底物菌液中菌体数保持在1.1 ×108个/mL左右;酶与菌液在样品池内经吸排法快速混合可趋近均相体系;酶的最佳用量为3μg;确定反应计时区间为0～60s;依据所制定的酶活性操作规程,确定重组人溶菌酶活性质量标准为45 000～ 65 000