血小板源性生长因子-BB对体外培养的牛眼小梁细胞中基质金属蛋白酶-2表达的影响

来源 :中华实验眼科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wolaile999
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背景 目前在青光眼的治疗研究中,血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)作为直接作用于小梁网的药物手术刀正处于研究中,期望药物成分能直接作用于小梁网,在不破坏正常房角生理结构的前提下,疏通小梁网房水流出通道,从而达到降眼压的目的. 目的 探讨PDGF-BB对体外培养的牛眼小梁细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响及其意义.方法 取新鲜牛眼球的小梁组织,以组织块培养法培养小梁细胞,通过形态学观察和神经元特异性烯醇化酶(NSE)染色对培养的细胞进行鉴定.将第3代小梁细胞接种于6孔培养板,在培养基中加入不同质量浓度(0、5.0、12.5、25.0μg/L)的PDGF-BB培养2h,分别采用逆转录PCR(RT-PCR)法和免疫组织化学法观察PDGF-BB对牛眼小梁细胞MMP-2 mRNA(相对值)和蛋白在小梁细胞中的表达水平,分析各组培养细胞中阳性信号的吸光度(A)值. 结果 牛眼小梁组织块培养5~9 d时可见细胞游出,第3代小梁细胞可见较多突起,细胞核居中,NSE染色细胞基质中呈绿色荧光.RT-PCR检测结果发现,0、5.0、12.5、25.0μg/L PDGF-BB组小梁细胞中MMP-2 mRNA/β-actin的A值分别为0.127±0.026、0.147±0.045、0.178土0.053和0.222±0.062,差异有统计学意义(F=56.71,P<0.05),其中5.0、12.5、25.0 μ g/LPDGF-BB组小梁细胞中MMP-2 mRNA表达量明显高于0μg/L PDGF-BB组,差异均有统计学意义(P<0.05).免疫组织化学检测发现,0、5.0、12.5、25.0 μg/L PDGF-BB组小梁细胞中MMP-2蛋白表达量(A值)分别为446.12±13.81、1444.65±54.64、2086.18±73.18和3488.65±25.98,差异有统计学意义(F=213.12,P<0.01),各组间两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 在体外培养的条件下,PDGF-BB可促进牛眼小梁细胞中MMP-2的表达,其作用呈剂量依赖的方式。

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