【摘 要】
：
【目的】培育具有抗草甘膦除草剂的棉花材料具有极其重要的意义。利用农杆菌介导法在棉花中转入编码EPSPS酶的抗草甘膦除草剂基因G10aroA,通过体细胞愈伤诱导组织培养技术获
【机 构】
：
山西农业大学农学院,山西省农业科学院棉花研究所生物技术实验室,运城学院生命科学系,浙江大学农业与生物技术学院,
论文部分内容阅读
【目的】培育具有抗草甘膦除草剂的棉花材料具有极其重要的意义。利用农杆菌介导法在棉花中转入编码EPSPS酶的抗草甘膦除草剂基因G10aroA,通过体细胞愈伤诱导组织培养技术获得能够稳定遗传的转基因棉花株系材料。【方法】首先,利用不同草甘膦抗性筛选条件比较分析不同棉花受体材料的愈伤诱导效率;其次,以R15材料作为受体,利用含有G10aroA的农杆菌侵染下胚轴切段,在进行体细胞愈伤诱导的组织培养过程中通过草甘膦抗性筛选获得棉花再生植株,对获得的棉花再生植株进行纯合繁育。在此基础上,利用PCR扩增检测证实外源G10aroA在转基因植株中能够稳定遗传;利用RT-PCR分析其外源基因在转基因植株不同组织中的转录水平进行研究、并进一步利用Western-blot对转基因植株中外源蛋白的表达进行分析。【结果】在优化的草甘膦筛选条件下,以草甘膦浓度为2.5 mmol·L-1的抗性条件进行棉花愈伤诱导筛选并获得棉花再生植株;利用特异引物进行PCR检测结果表明,在检测的全部再生植株中,扩增得到1.8 kb预期大小目标条带的阳性株系32株,其中,收获的27个株系的外源目标基因能够在T0、T1转基因植株中稳定遗传;对G10aroA在转基因株系L12、L14的不同组织中的转录表达进行定量RT-PCR分析表明,外源G10aroA在转基因棉花植株的不同组织中表达具有差异,相对表达量高低依次为茎、苞叶、叶和花;另外,蛋白检测结果进一步表明,该外源基因能够在转基因株系L7、L12和L14中植株中正常表达为预期46 kD的EPSPS蛋白。【结论】通过农杆菌介导法转化外源抗草甘膦基因G10aroA,在草甘膦抗性条件下进行棉花体细胞诱导的组织培养,成功获得转外源G10aroA的棉花再生株系,并通过分子生物学方法研究证实外源G10aroA能够在T0、T1转基因株系中稳定遗传、转录以及表达。
其他文献
学生欠费,逐渐成为各大高校办学过程中一个问题.针对学生欠费问题,现阶段各大高校普遍的做法主要有:暂扣学生毕业证,对学生进行劝退或勒令休学,或扣发老师的工资、班主任津贴
本文对斑点叉尾鮰疱疹病毒核酸探针检测方法进行了研究。采用PCR方法制备地高辛标记DNA探针,分别建立了CCV PCR-ELISA检测方法和斑点杂交检测方法,主要结果如下:1.根据CCV的O
信息技术和语文教学的整合问题,随着国家新课程标准的颁布越来越被重视.如何在现代教育理论的指导下,充分利用信息技术资源,优化课堂教学,改革传统教学中不适应时代潮流的部
海洋拥有十分丰富的生物资源，是地球上最为重要的生命支持系统，也是人类最为重要的食物保障之一。许多海洋生物具有开发利用价值，海洋渔业为人类提供了丰富的食物和其他多种用途
榜样教育是思想政治教育的基本方法之一,在青少年道德人格发展过程中发挥着重要的作用,但当前我国的榜样教育却面临着“为了席勒而忘掉莎士比亚”的局面,即不顾历史真实性和
如何在语文教学中正确把握语文教育的特点,在教学过程中,一要发挥语文的人文性,二要加强语文的实践性,三要重视汉语言文字的特点.
军队院校在我军现代化建设中具有基础性、全局性、先导性的作用,是军队人才培养的主阵地.但是,随着依托国民教育培养军队人才机制的不断完善和发展,一些军队院校的职能也随之
苏培成先生在其文章中曾经说过:一个人不能使用规范的语言、高尚的语言进行交际,就是语言残疾人.这样的人,在社会中将很难发挥积极的作用.由于现代汉语课程自身的工具性和理
现代教育的特征充分展现人的主体性,追求人的全面发展.因此在幼儿数学课堂教学中应引导幼儿全面、主动、和谐地进行学习.最大限度地调动幼儿学习的积极性,让他们在数学王国里
小组合作学习有利于实现教学效果的飞跃,大大提高英语课堂的教学效率.随着课程改革的深入,我们应不断探索研究小组合作学习的做法,让学生在完成各项任务时发挥出最大的热情和