【摘 要】
：
[背景]牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)是致犊牛腹泻的重要病原之一,而目前BVDV与宿主因子互作机理研究较少,成为限制BVDV防控的重要原因.[目的]探明囊泡相关膜蛋白A (vesicle-associated membrane proteinA,VAPA)对BVDV复制的影响.[方法]根据GenBank中VAPA基因,使用Benchling和CHOPCHOP等平台设计靶向VAPA的向导RNA(small guide RNA,sgRNA),融合后克隆至慢
【机 构】
：
新疆农业大学动物医学学院,新疆乌鲁木齐830052
论文部分内容阅读
[背景]牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)是致犊牛腹泻的重要病原之一,而目前BVDV与宿主因子互作机理研究较少,成为限制BVDV防控的重要原因.[目的]探明囊泡相关膜蛋白A (vesicle-associated membrane proteinA,VAPA)对BVDV复制的影响.[方法]根据GenBank中VAPA基因,使用Benchling和CHOPCHOP等平台设计靶向VAPA的向导RNA(small guide RNA,sgRNA),融合后克隆至慢病毒lentiCRISPR v2载体中,包装慢病毒后感染牛肾细胞(Madin-Darby bovine kidney,MDBK),使用嘌呤霉素连续筛选5代,使用Western Blot检测VAPA蛋白敲除(knockout,KO)情况;BVDV感染VAPA KO细胞不同时间后,收集细胞提取总RNA,并将等质量的RNA反转录成cDNA,使用实时荧光定量PCR (real-time quantitative PCR,RT-qPCR)和免疫荧光分析(immunofluorescence assay,IFA)分别检测BVDV5\'-非翻译区(untranslated region,UTR) mRNA水平和双链RNA (double strand RNA,dsRNA)积累水平,于BVDV感染后不同时间观察致细胞病变(cytopathic effect,CPE)情况,并收集子代病毒液,使用Reed-Muench法计算子代病毒滴度变化.接种等量VAPA KO和乱码序列对照scramble细胞后不同时间进行活细胞计数,检测VAPA KO是否影响细胞活性.[结果]慢病毒感染后使用嘌呤霉素筛选,Western Blot检测VAPA蛋白明显降低,成功获得VAPA KO细胞;与对照scramble细胞相比,BVDV感染VAPA KO细胞后5\'-UTR mRNA水平和dsRNA积累量均显著性降低,BVDV感染造成的CPE明显推迟并减轻,子代病毒滴度在12h和36h显著下降,在48 h极显著下降;与scramble细胞相比,VAPA KO细胞活性未受影响.[结论]VAPA KO后显著性抑制BVDV复制,为BVDV防控新技术的建立提供重要靶标.
其他文献
[背景]副溶血性弧菌是全球范围重要的食源性病原菌,能引起急性肠胃炎.群体感应系统LuxS/AI-2影响细菌的生物学特性,为研究副溶血性弧菌的传播机制和控制技术提供了新的途径.[目的]探讨群体感应信号分子AI-2合成关键基因luxS对海产品中分离的副溶血性弧菌Vp2009027生物学特性的影响.[方法]利用自杀质粒同源重组技术敲除信号分子AI-2合成关键基因luxS,构建副溶血性弧菌Vp2009027的luxS基因缺失株,通过比较野生株与luxS基因缺失株的生长曲线、AI-2活性、运动能力、生物膜形成能力和
人类粪菌移植(fecal microbiota transplantation,FMT)早在19世纪50年代的西方医学中便有临床应用.FMT已被证明可以很好地缓解艰难梭菌感染(Clostridium difficile infection,CDI)的胃肠道疾病,在调节微生物-肠-脑轴(microbiota-gut-brain axis,MGBA)从而改善抑郁症方面也有一定的应用和疗效.为了探讨粪菌移植通过调节微生物-肠-脑轴改善抑郁症的可能性,为抑郁症的改善提供新的思路和方法,本文参考了近5年的相关文献,
[背景]根腐病在青稞生产中的危害日趋严重,阻碍了青稞根腐病的有效防控及青海省青稞产业的发展.然而人们对青稞根腐病的研究甚少且病原菌不详.[目的]明确青稞根腐病发生的危害、病原及致病性,为青稞根腐病的防控提供理论依据.[方法]采用常规的组织分离法分离青稞根腐病病原,通过形态鉴定与分子鉴定结合的方法对病原进行鉴定,并采用烧杯水琼脂法测定其致病性.[结果]共分离得到4株青稞根腐病病原菌,鉴定为Clonostachys rosea,有较强的致病性且致病性差异显著,经柯赫氏法则验证为青稞根腐病病原菌,并且是一种新的
肠道作为人体消化吸收的重要场所,是人体最大的免疫器官,在维持正常生理活动中发挥着非常重要的作用.随着人类饮食的多元化,肠道菌群对健康的影响吸引了越来越多的关注.肠道微生态与免疫、代谢系统疾病和肿瘤等50多种疾病相关,同时疾病也会影响肠道菌群,通过饮食调节和用药会影响肠道菌群,进而影响健康.白术散是以食药两用药材为主的方剂,能够改善肠道微生态、健脾益气、和胃生津,进而达到调整人体健康的目的 .近年来,诸多临床研究和动物试验在研究白术散治疗肠道菌群失调相关疾病方面取得了显著进展.本文就白术散对肠道微生态的作用
革兰氏阴性细菌由于具有复杂的双层膜结构,其蛋白质分泌能力较差.这使得革兰氏阴性细菌的典型菌株——大肠杆菌作为最常用的受体细胞在生物制药工程和其他生物技术产品生产中受到一定的限制.因此,革兰氏阴性细菌蛋白分泌系统的研究具有重要意义.本文详细地归纳了革兰氏阴性细菌已知的蛋白分泌系统,分别从分泌系统的分泌过程、分泌蛋白类别、结构组成和研究技术4个方面做了论述,以期为进一步解析革兰氏阴性细菌蛋白分泌机制提供参考.
[背景]建立细菌性动物腹泻模型是研究细菌性腹泻机制及抗腹泻药机理的常用方法.[目的]从临床腹泻犊牛粪便中分离出5株不同血清型大肠杆菌(Escherichia coli),经口灌服小鼠建立与临床犊牛腹泻症状近似的小鼠腹泻模型.[方法]72只昆明小鼠随机分为6组,每组12只,分为正常对照组(NC)、E.coli O1干预组、E.coli O2干预组、E.coli O8干预组、E.coli O78干预组和E.coli O86干预组,攻毒组大肠杆菌浓度均为3×1013 CFU/mL,每10 g体重灌服0.2 mL
[背景]肠道菌群与宿主健康及环境适应性密切相关,牦牛为青藏高原特有的草食性反刍动物,不同海拔高度如何影响牦牛肠道菌群组成及肠道菌群在牦牛适应高海拔生境中的作用尚不清楚.[目的]探究青藏高原放牧牦牛肠道菌群多样性及其与海拔高度间的关系.[方法]采集青海省玛沁县(海拔4220 m)和乐都县(2745 m)2个海拔高度放牧牦牛的22份新鲜粪便样品,然后利用16S rRNA基因通用引物扩增V3-V4区并进行高通量测序和分析.[结果]从22份样品中共获得l 723018条有效序列,通过聚类共获得1113个操作分类单
[背景]番茄青枯病是由青枯劳尔氏菌Ralstonia solanacearum)引起的一种土传细菌性病害,该病原菌严重影响番茄的生产.[目的]筛选番茄青枯病的生防细菌,并将其用于病害防治.[方法]采用抑菌圈法、琼脂扩散法从湖南衡阳青枯病发病田的健康番茄根际土壤筛选对青枯劳尔氏菌具有较强拮抗能力的菌株,通过形态学观察、生理生化试验、16S rRNA基因和gyrA基因测序分析确定其分类地位;以单因素试验和正交试验对发酵条件进行优化;通过田间小区试验初探其防效.[结果]筛选的菌株TR-1被初步鉴定为贝莱斯芽孢杆
[背景]鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)是一种重要的人兽共患病原菌,其多重耐药性问题日益严重,双组分系统可调控鼠伤寒沙门氏菌的耐药性.[目的]通过构建鼠伤寒沙门氏菌baeR过表达株及回补株探究BaeSR双组分系统对鼠伤寒沙门氏菌耐药性的影响.[方法]在BaeSR双组分系统和AcrB外排泵双缺失株(CR△baeSR△acrB)的基础上构建baeR过表达株(CRpbaeR△baeSR△acrB)及baeR回补株(CRcbaeR△baeSR△acrB),测定双缺失株、回补株和过表达
秸秆是世界上最丰富的生物质资源之一,秸秆还田作为秸秆利用的主要方式,与农业可持续发展密切相关.微生物是土壤微生态系统中最活跃的生物因子,是土壤质量的重要生物学评价指标,也是受秸秆还田影响最为敏感的土壤因子.为了解秸秆还田所带来的土壤微生态效应,本文从土壤酶活性、微生物生物量、可培养微生物种群及微生物多样性等4个方面进行综述,分析了不同还田条件下土壤微生态指标的差异,讨论了现阶段秸秆还田研究的局限性,并对今后的研究方向进行了展望,以期为秸秆安全还田提供依据.