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材料与方法
药材来源：膜夹黄芪，购于内蒙古。
试药与试剂：黄芪甲苷对照品。
仪器与设备：ShimadzuLC-6A高效液相色谱仪，C-R4A数据处理机，DU-70分光光度计(Beckman公司)。
处方：北芪精口服液处方是由单味药黄芪构成，其中添加炼蜜(椴树蜜)、纯化水、乙醇、香精、柠檬酸钠、山梨酸钠等辅料制成。
提取工艺试验设计：根据黄芪甲苷的理化性质及中药材传统的提取经验，确定考察因素为药材浸泡时间(A)，加水量(B)，煎煮时间(C)和煎煮次数(D)，每个因素确定了3个水平。
药材的提取：用天平取净黄芪饮片50g，置于加盖的铝锅中，按正交实验表设计的方法，浸泡A小时，B倍量的水，煎煮C小时，煎煮前D次进行试验。水煎液过滤，滤液浓缩至适宜体积后，用95%乙醇醇沉3次，第1次使滤液含醇量达到45%，放置48小时，取上清液，过滤，滤液回收乙醇；第2次使滤液含醇量达到60%，放置24小时，取上清液，过滤，滤液回收乙醇；第3次滤液使含醇量达到75%放置24小时，取上清液，过滤、滤液回收乙醇，浓缩，定容于500ml容量瓶子，备用。(根据试验所设计的浸泡时间，煎煮时间、煎煮用水量及煎煮次数，按此方法每项分别进行3次试验，结果取平均值。)
黄芪甲苷含量测定：根据文献报道黄芪苷的测定方法，有比色法[1]薄层层析±紫外分光光度法、薄层扫描法、高效液相色谱法(HPLC)[2]、反相高效液相色谱法。笔者采用高效液相色谱法(HPLC)测定黄芪甲苷的含量[2]。
供试品溶液的制备：用移液管精密量取药液20ml，置分液漏斗中，加入氢氧化钠1g，振摇使之溶解，用正丁醇提取3次，每次量为20ml，合并正丁醇层，正丁醇液水浴蒸干，用甲醇溶解，并转入5ml溶量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。过滤，取续滤液作为供试品溶液。
对照品溶液的制备：用分析天平精密称取黄芪对照品5.0mg，用甲醇溶解，制成每1.0000mg/ml的溶液。
色谱条件与进样分析：Shimpack CLC-ODS色谱柱(150mm×6mm，5μm，id)；流动相为乙腈-水(35：65)，流速1ml/分；柱温35℃；检验波长203nm，灵敏度0.08AUFS。精密吸取对照品溶液20μl及供试品溶液10μl或20μl，注入高效液相色谱仪，以外标法计算含量。在上述色谱条件下，滤液中黄芪甲苷与其他成分分离较好，阴性对照品无干扰。
线性关系的考察：用分析天平精密称取黄芪对照品，取2.080mg、4.161mg、8.322mg、12.48mg、16.64mg，置于10ml容量瓶中，用甲醇溶液溶解并稀释至刻度，配制成0.208、0.416、0.832、1.248、1.664mg/ml的5种浓度的溶液。分别精密吸取20μl注入高效液相色谱仪，每种浓度进样3次，以峰面积(A)对进样量(C)进行线性回归，得回归方程：A=-542.9+6857.2C，r=0.9998。在进样量4.16～33.28mg范围内线性关系良好。
回归率的测定：用分析天平精密称取9份已测定浓度为1.002mg/ml的黄芪甲苷溶液，加入一定量的水使总体积为20ml。分别加入黄芪甲苷对照品1mg，按上述方法制成供试品溶液，测定，计算，得平均回收率为98.14%，RSD=1.80%(n=9)。
提取结果分析：经过试验得出加水量的多少对提取效果的影响小，而且加4倍量的水会增加生产成本，因此考虑加2倍量的水，比较经济。但经过综合恒量得出最佳的提取工艺应为，加水浸泡4小时，每次加入药材3倍量的水，每次煎煮45分钟，煎煮3次。从最佳提取条件所提取的结果看，黄芪甲苷的含量约为0.18%，高于药典所规定的0.04%。所以此提取工艺具有较强的科学性，为今后的工艺改革提供了有利的依据。
对黄芪多糖含量的考察：一是为了证明上述试验的有效性，二是为今后提高北芪精口服液的质量标准提供依据。试验[3]采用分光光度法。
标准溶液配制：用分析天平精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖0.1000g，加蒸馏水溶解，定容于100ml容量瓶中，摇匀。移取10.0ml，以蒸馏水定容于100ml容量瓶摇匀，得到0.1mg/ml标准溶液。
苯酚溶液配制：分别吸取葡萄糖标准溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml于25ml比色管中，加蒸馏水至刻度，混匀。并移取该溶液2.0ml于比色管中，加入苯酚溶液1.0ml，摇匀，迅速加入浓H2SO45.0ml，摇匀，放置5分钟，置沸水浴中加热15分钟，迅速冷却至室温。另以2.0ml蒸馏水作空白对照。在490nm波长处测定吸光度，线性回归方程C=447A-5505，r=0.9954，并绘出回归曲线(C：mg/ml)，即为标准曲线。
黄芪多糖(APS)的测定：取净黄芪饮片50g3份，按上述最佳提取工艺提取，按原醇沉工艺醇沉，药液浓缩，105℃干燥，精密称取样品0.0500g置于100ml容量瓶中，加水溶解，并稀释至刻度，摇匀，得样品溶液。准确移取5.0ml于50ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，备用。测定时移取0.5ml，按标准曲线绘制的方法测定吸光度值(每份样品测定3次，取平均值)，并从回归曲线上查出多糖的对应含量(mg/ml)，计算出样品中多糖的含量(mg/ml)。试验结果：试验编号1～9相对应的多糖含量分别为10.05、11.31、10.92、10.11、10.94、11.22、10.17、10.11、9.95，平均值10.53。
稳定性实验：取上述样品溶液每0.5小时测定1次吸光度值，2小时内测定值不变。
回收率实验：准确移取溶液1.0ml(共取9份)，置于10ml比色管中，分别加入10mg/ml标准溶液1.0ml，加水稀释至刻度，按样品测定方法，测定共吸光度值。计算回收率为101.2%；RSD=1.5%(n=9)。从试验结果看，黄芪多糖含量测定的试验比较稳定，药液中黄芪多糖的含量大约为10.53mg/ml。
讨 论
在北芪精口服液生产中，影响因素较多，本试验中对其中4项进行了研究，得出最佳提取方法。由于利用正交实验表安排试验时，试验结果的差异可能是由各因素及其正交作用引起的，也可能是由试验的其他随机波动引起的，所以本试验结果有待于进一步方差分析。还有待于在生产实际中进一步验证。试验时还对正丁醇提取次数进行了考察，结果发现：用正丁醇提取2次以上，测得的黄芪甲苷含量基本不变。用最佳提取方法所制备药液中，黄芪甲苷含量约为18mg/ml，黄芪多糖含量约为10.53mg/ml。
参考文献
1 俞家华，曹正中，张勤.膜夹黄芪中黄芪甲苷的含量测定.中药通报，1986，11(9)：38-39.
2 欢欣，郝桂明，赵春杰，等，反相高效液相色谱法测定黄芪的含量.中国药学杂志，2003，38(3)：212.
3 赵文，任永凤，樊建航.伊利黄芪成分的比较及多糖含量的测定.中草药，2001，32(2)：122-124.
药材来源：膜夹黄芪，购于内蒙古。
试药与试剂：黄芪甲苷对照品。
仪器与设备：ShimadzuLC-6A高效液相色谱仪，C-R4A数据处理机，DU-70分光光度计(Beckman公司)。
处方：北芪精口服液处方是由单味药黄芪构成，其中添加炼蜜(椴树蜜)、纯化水、乙醇、香精、柠檬酸钠、山梨酸钠等辅料制成。
提取工艺试验设计：根据黄芪甲苷的理化性质及中药材传统的提取经验，确定考察因素为药材浸泡时间(A)，加水量(B)，煎煮时间(C)和煎煮次数(D)，每个因素确定了3个水平。
药材的提取：用天平取净黄芪饮片50g，置于加盖的铝锅中，按正交实验表设计的方法，浸泡A小时，B倍量的水，煎煮C小时，煎煮前D次进行试验。水煎液过滤，滤液浓缩至适宜体积后，用95%乙醇醇沉3次，第1次使滤液含醇量达到45%，放置48小时，取上清液，过滤，滤液回收乙醇；第2次使滤液含醇量达到60%，放置24小时，取上清液，过滤，滤液回收乙醇；第3次滤液使含醇量达到75%放置24小时，取上清液，过滤、滤液回收乙醇，浓缩，定容于500ml容量瓶子，备用。(根据试验所设计的浸泡时间，煎煮时间、煎煮用水量及煎煮次数，按此方法每项分别进行3次试验，结果取平均值。)
黄芪甲苷含量测定：根据文献报道黄芪苷的测定方法，有比色法[1]薄层层析±紫外分光光度法、薄层扫描法、高效液相色谱法(HPLC)[2]、反相高效液相色谱法。笔者采用高效液相色谱法(HPLC)测定黄芪甲苷的含量[2]。
供试品溶液的制备：用移液管精密量取药液20ml，置分液漏斗中，加入氢氧化钠1g，振摇使之溶解，用正丁醇提取3次，每次量为20ml，合并正丁醇层，正丁醇液水浴蒸干，用甲醇溶解，并转入5ml溶量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。过滤，取续滤液作为供试品溶液。
对照品溶液的制备：用分析天平精密称取黄芪对照品5.0mg，用甲醇溶解，制成每1.0000mg/ml的溶液。
色谱条件与进样分析：Shimpack CLC-ODS色谱柱(150mm×6mm，5μm，id)；流动相为乙腈-水(35：65)，流速1ml/分；柱温35℃；检验波长203nm，灵敏度0.08AUFS。精密吸取对照品溶液20μl及供试品溶液10μl或20μl，注入高效液相色谱仪，以外标法计算含量。在上述色谱条件下，滤液中黄芪甲苷与其他成分分离较好，阴性对照品无干扰。
线性关系的考察：用分析天平精密称取黄芪对照品，取2.080mg、4.161mg、8.322mg、12.48mg、16.64mg，置于10ml容量瓶中，用甲醇溶液溶解并稀释至刻度，配制成0.208、0.416、0.832、1.248、1.664mg/ml的5种浓度的溶液。分别精密吸取20μl注入高效液相色谱仪，每种浓度进样3次，以峰面积(A)对进样量(C)进行线性回归，得回归方程：A=-542.9+6857.2C，r=0.9998。在进样量4.16～33.28mg范围内线性关系良好。
回归率的测定：用分析天平精密称取9份已测定浓度为1.002mg/ml的黄芪甲苷溶液，加入一定量的水使总体积为20ml。分别加入黄芪甲苷对照品1mg，按上述方法制成供试品溶液，测定，计算，得平均回收率为98.14%，RSD=1.80%(n=9)。
提取结果分析：经过试验得出加水量的多少对提取效果的影响小，而且加4倍量的水会增加生产成本，因此考虑加2倍量的水，比较经济。但经过综合恒量得出最佳的提取工艺应为，加水浸泡4小时，每次加入药材3倍量的水，每次煎煮45分钟，煎煮3次。从最佳提取条件所提取的结果看，黄芪甲苷的含量约为0.18%，高于药典所规定的0.04%。所以此提取工艺具有较强的科学性，为今后的工艺改革提供了有利的依据。
对黄芪多糖含量的考察：一是为了证明上述试验的有效性，二是为今后提高北芪精口服液的质量标准提供依据。试验[3]采用分光光度法。
标准溶液配制：用分析天平精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖0.1000g，加蒸馏水溶解，定容于100ml容量瓶中，摇匀。移取10.0ml，以蒸馏水定容于100ml容量瓶摇匀，得到0.1mg/ml标准溶液。
苯酚溶液配制：分别吸取葡萄糖标准溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml于25ml比色管中，加蒸馏水至刻度，混匀。并移取该溶液2.0ml于比色管中，加入苯酚溶液1.0ml，摇匀，迅速加入浓H2SO45.0ml，摇匀，放置5分钟，置沸水浴中加热15分钟，迅速冷却至室温。另以2.0ml蒸馏水作空白对照。在490nm波长处测定吸光度，线性回归方程C=447A-5505，r=0.9954，并绘出回归曲线(C：mg/ml)，即为标准曲线。
黄芪多糖(APS)的测定：取净黄芪饮片50g3份，按上述最佳提取工艺提取，按原醇沉工艺醇沉，药液浓缩，105℃干燥，精密称取样品0.0500g置于100ml容量瓶中，加水溶解，并稀释至刻度，摇匀，得样品溶液。准确移取5.0ml于50ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，备用。测定时移取0.5ml，按标准曲线绘制的方法测定吸光度值(每份样品测定3次，取平均值)，并从回归曲线上查出多糖的对应含量(mg/ml)，计算出样品中多糖的含量(mg/ml)。试验结果：试验编号1～9相对应的多糖含量分别为10.05、11.31、10.92、10.11、10.94、11.22、10.17、10.11、9.95，平均值10.53。
稳定性实验：取上述样品溶液每0.5小时测定1次吸光度值，2小时内测定值不变。
回收率实验：准确移取溶液1.0ml(共取9份)，置于10ml比色管中，分别加入10mg/ml标准溶液1.0ml，加水稀释至刻度，按样品测定方法，测定共吸光度值。计算回收率为101.2%；RSD=1.5%(n=9)。从试验结果看，黄芪多糖含量测定的试验比较稳定，药液中黄芪多糖的含量大约为10.53mg/ml。
讨 论
在北芪精口服液生产中，影响因素较多，本试验中对其中4项进行了研究，得出最佳提取方法。由于利用正交实验表安排试验时，试验结果的差异可能是由各因素及其正交作用引起的，也可能是由试验的其他随机波动引起的，所以本试验结果有待于进一步方差分析。还有待于在生产实际中进一步验证。试验时还对正丁醇提取次数进行了考察，结果发现：用正丁醇提取2次以上，测得的黄芪甲苷含量基本不变。用最佳提取方法所制备药液中，黄芪甲苷含量约为18mg/ml，黄芪多糖含量约为10.53mg/ml。
参考文献
1 俞家华，曹正中，张勤.膜夹黄芪中黄芪甲苷的含量测定.中药通报，1986，11(9)：38-39.
2 欢欣，郝桂明，赵春杰，等，反相高效液相色谱法测定黄芪的含量.中国药学杂志，2003，38(3)：212.
3 赵文，任永凤，樊建航.伊利黄芪成分的比较及多糖含量的测定.中草药，2001，32(2)：122-124.