【摘 要】
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目的 探讨miR-31-5p通过VPS53介导的自噬对结直肠癌细胞增殖的影响.方法 选择人正常结直肠黏膜细胞(FHC)及结直肠癌细胞株HT29、HCT116、SW480、LoVo进行研究.采用实时荧光定量PCR实验检测miR-31-5p在前述各种细胞中的表达,miR-31-5p对VPS53 RNA表达的影响,miR-31-5p、VPS53对Beclin1 RNA表达的影响.采用CCK-8法检测细胞活力.利用数据库Targetscan筛选与miR-31-5p靶向结合的靶基因,并通过双荧光素酶报告实验进行验证
【机 构】
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南充市中心医院肛肠外科 四川南充 637000;南充市中心医院胃肠外科 四川南充 637000;南充市中心医院中西医结合科 四川南充 637000
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目的 探讨miR-31-5p通过VPS53介导的自噬对结直肠癌细胞增殖的影响.方法 选择人正常结直肠黏膜细胞(FHC)及结直肠癌细胞株HT29、HCT116、SW480、LoVo进行研究.采用实时荧光定量PCR实验检测miR-31-5p在前述各种细胞中的表达,miR-31-5p对VPS53 RNA表达的影响,miR-31-5p、VPS53对Beclin1 RNA表达的影响.采用CCK-8法检测细胞活力.利用数据库Targetscan筛选与miR-31-5p靶向结合的靶基因,并通过双荧光素酶报告实验进行验证.利用数据库GEPIA分析VPS53和Beclin1表达的相关性.采用透射电子显微镜实验探究VPS53对细胞自噬的影响.采用蛋白免疫印迹实验(Western blot)分析VPS53对Beclin1蛋白表达的影响.结果 与FHC细胞相比,HCT116、LoVo、HT29、SW480细胞的miR-31-5p表达水平均升高(均P＜0.05).过表达miR-31-5p可促进LoVo细胞增殖(P＜0.05).miR-31-5p与VPS53靶向结合.过表达miR-31-5p可下调VPS53的RNA表达水平(P＜0.05).过表达VPS53可抑制LoVo细胞增殖,可逆转过表达miR-31-5p对LoVo细胞增殖的促进作用(均P＜0.05).结直肠癌组织中的VPS53与Beclin1的表达呈正相关.过表达VPS53促进自噬小体的形成.过表达VPS53可上调Beclin1蛋白的表达水平(P＜0.05).自噬抑制剂可逆转过表达VPS53对LoVo细胞增殖的抑制作用(P＜0.05).过表达miR-31-5p可下调Beclin1的RNA表达水平,过表达VPS53可逆转该现象(均P＜0.05).结论 miR-31-5p是结直肠癌发生发展中的重要调控因子,miR-31-5p在结直肠癌细胞中高表达.miR-31-5p可能通过下调VPS53来抑制Beclin1的表达,通过抑制自噬来促进结直肠癌细胞的增殖.
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背景:低位前切除术后临时性回肠造口关闭的最佳时机仍然是未能明确的.rn目的:本研究旨在对早期(2周)和晚期(12周)造口关闭进行比较.rn设计:平行、多中心、随机、对照临床研究.rn设置:该研究在3家瑞士医院开展.rn患者:因癌症而接受低位前切除术和临时性回肠造口术的患者.rn干预:患者被随机分配至早期关闭组或晚期关闭组.在造口关闭之前,对结肠吻合的完整性进行检查.rn主要结局指标:主要研究终点是切除术后6周的生活质量(胃肠道生活质量指数).次要研究终点包括安全性、可行性和低位前切除术后4个月的生活质量.
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