甲型鸭肝炎病毒2A蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备

• 作 者: 胡文 孟春春 李传峰 陈宗艳 梁瑞英 李宁 黄云秀 吴润 刘光清
• 机 构: 甘肃农业大学动物医学院，甘肃 兰州 730070 中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200241;中国农业科学院上海兽医研究所,上海,200241;甘肃农业大学动物医学院,甘肃 兰州,730070
• 出 处: 甘肃农业大学学报
• 发表日期: 2014年6期
• 关键词: 甲型鸭肝炎病毒 2A蛋白 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体

采用 RT-PCR方法从甲型鸭肝炎病毒 ZJ-V 株的 RNA 模板中扩增出2A基因,将其克隆到表达载体pET-30(+)中,经酶切和测序鉴定后转化表达宿主菌 BL21(DE3)细胞中,以 IPTG诱导表达 His-DHAV-2A 融合蛋白。结果表明：目的蛋白在1 mmol/L IPTG诱导4 h的情况下以可溶性形式表达。表达产物经 Ni 柱纯化后获得了高纯度的融合蛋白。以纯化后的 His-DHAV-2A 融合蛋白为抗原免疫白兔制备多抗,Western-blot 试验表明制备的多抗可与目的蛋白发生特异性反应。以上结果说明,DHAV的2A蛋白在大肠杆菌中成功表达,且制备的多抗血清可用于2A蛋白的表达检测。